dc.creator | Silva, Lucélia Magalhães da | |
dc.date.accessioned | 2017-03-03 | |
dc.date.available | 2017-03-03 | |
dc.date.issued | 2009-03-17 | |
dc.identifier.citation | SILVA, Lucélia Magalhães da. Development and validation of chromatographic methods for the evaluation of interferon-alfa 2a in pharmaceutical formulations. 2009. 74 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria, 2009. | por |
dc.identifier.uri | http://repositorio.ufsm.br/handle/1/5904 | |
dc.description.abstract | The interferon is a cytokine with antiviral, antiproliferative, and immunomodulatory
properties. It is a protein synthesized by cells in response to viral infection, producing successive
biochemistry alterations. The chromatographic methods for evaluation of recombinant interferon-alfa
2a (rhIFN-α2a) in pharmaceutical products were validated in the present work. The reversed-phase
liquid chromatography method (RP-LC) was developed and validated using a Jupiter C4 column (250
mm x 4.6 mm), maintained at ambient temperature (25°C). The mobile phase A consisted of 0.1%
trifluoroacetic acid (TFA) and mobile phase B consisted of 0.1% TFA in acetonitrile, run in gradient:
0.01 1 min, 38% of B; 1 5 min, 38 43% of B; 5.01 20 min, 43 45% of B; 20.01 30 min, 45
48% of B; 30.01 40 min linear back to 38% of B and 40 42 min, 38% of B. The flow rate used
was 1 mL/min with detection at 214 nm. The chromatographic separation was obtained within 42 min
and it was linear in the concentration range of 0.5 50 MIU/mL (r2=0.9999). The size exclusion
method was developed and validated using a BioSep-SEC-S 2000 (300 mm x 7.8 mm), maintained at
ambient temperature (25°C). The mobile phase consisted of 1mM potassium phosphate monobasic,
8mM sodium phosphate dibasic and 200mM sodium chloride buffer, pH 7.4, run at a gradient flow
rate: 0.01 20 min, 0.5 mL/min; 20 25 min, 0.5 1.7 mL/min; 25 35 min, 1.7 mL/min; 35 38
min, 1.7 0.5 mL/min; 38 40 min, 0.5 mL/min. The method was linear in the concentration range of
0.5 - 50 MIU/mL (r2=0.9996). The procedures were validated by the parameters of specificity,
linearity, precision, accuracy, robustness, limit of quantitation and limit of detection. The methods
were applied for the evaluation of the rhIFN-α2a in pharmaceutical products, contributing for the
establishment of alternatives which improve the quality control, assuring the safety and therapeutic
efficacy of the biological product. | eng |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior | |
dc.format | application/pdf | por |
dc.language | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de Santa Maria | por |
dc.rights | Acesso Aberto | por |
dc.subject | Cromatografia líquida | por |
dc.subject | Exclusão molecular | por |
dc.subject | Fase reversa | por |
dc.subject | Interferon alfa | por |
dc.subject | Validação | por |
dc.subject | Interferon alfa | eng |
dc.subject | Liquid chromatography | eng |
dc.subject | Reversed phase | eng |
dc.subject | Size exclusion | eng |
dc.subject | Validation | eng |
dc.title | Desenvolvimento e validação de métodos cromatográficos para avaliação de interferon-alfa 2a em formulações farmacêuticas | por |
dc.title.alternative | Development and validation of chromatographic methods for the evaluation of interferon-alfa 2a in pharmaceutical formulations | eng |
dc.type | Dissertação | por |
dc.description.resumo | O interferon é uma citocina que possui ação antiviral, imunomoduladora e antiproliferativa. É uma proteína sintetizada pelas células em resposta a infecção viral, gerando sucessivas alterações bioquímicas. No presente trabalho foram validados métodos cromatográficos para a avaliação de interferon-alfa 2a (rhIFN-α2a) em produtos farmacêuticos. O método por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) foi desenvolvido e validado empregando coluna Júpiter C4 (250 mm x 4,6 mm),
mantida a temperatura ambiente (25°C). A fase móvel A foi composta de ácido trifluoracético 0,1% e a fase móvel B de ácido trifluoracético 0,1% em acetonitrila, eluídas no gradiente: 0,01 1 min, 38% de B; 1 5 min, 38 43% de B; 5,01 20 min, 43 45% de B; 20,01 30 min, 45 48% de B; 30,01
40 min, 48 38% de B, mantendo-se nesta proporção até 42 min. Utilizou-se vazão de 1 mL/min e
detecção no ultravioleta a 214 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 42 min, sendo
linear na faixa de concentração de 0,5 - 50 MUI/mL (r2=0,9999). Paralelamente, desenvolveu-se e
validou-se método cromatográfico por exclusão molecular (CL-EM) empregando coluna BioSep-SECS
2000 (300 mm x 7,8 mm), mantida a temperatura ambiente (25°C). A fase móvel foi composta de
tampão fosfato de potássio monobásico 1mM, fosfato de sódio dibásico 8mM e cloreto de sódio
200mM, pH 7,4, eluída no gradiente de fluxo: 0,01 20 min, 0,5 mL/min; 20 25 min, 0,5 1,7
mL/min; 25 35 min, 1,7 mL/min; 35 38 min, 1,7 0,5 mL/min; 38 40 min, 0,5 mL/min. O
método foi linear na faixa de concentração de 0,5 - 50 MUI/mL (r2=0,9996). Ambos os procedimentos
foram validados com base nos parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez,
limite de quantificação e detecção. Os métodos foram aplicados para avaliação de rhIFN-α2a em
produtos farmacêuticos, contribuindo para o estabelecimento de alternativas que aprimoram o controle
da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica do produto biológico. | por |
dc.contributor.advisor1 | Dalmora, Sergio Luiz | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4505166045049607 | por |
dc.contributor.referee1 | Bartolini, Paolo | |
dc.contributor.referee1Lattes | http://lattes.cnpq.br/3737390739124657 | por |
dc.contributor.referee2 | Ribela, Maria Teresa de Carvalho Pinto | |
dc.contributor.referee2Lattes | http://lattes.cnpq.br/5036017643483794 | por |
dc.creator.Lattes | http://lattes.cnpq.br/3175417937754649 | por |
dc.publisher.country | BR | por |
dc.publisher.department | Farmacologia | por |
dc.publisher.initials | UFSM | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas | por |
dc.subject.cnpq | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIA | por |