Vitrificação de oócitos bovinos imaturos
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Data
2002-02-22Primeiro membro da banca
Rheingantz, Maria Gabriela Tavares
Segundo membro da banca
Azambuja, Ricardo Marques de
Metadata
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A constante evolução das biotécnicas da reprodução tem originado novos desafios em diferentes áreas. Na criobiologia, o atual desafio é a obtenção de uma adequada metodologia para a criopreservação de oócitos bovinos, especialmente no estágio imaturo. Com este propósito, foi conduzido o presente estudo que tem como objetivos avaliar o desenvolvimento in vitro e in vivo de embriões derivados de oócitos imaturos vitrificados com a tecnologia OPS, além de avaliar o efeito do pré-tratamento com citocalasina D (CD) e a eficácia da solução crioprotetora composta por 20% de etileno glicol (EG) + 20% de dimetil sulfóxido (Me2SO) + 0.5 M de sacarose (SAC). Oócitos obtidos de ovários de matadouro foram aleatoriamente distribuídos em três grupos: controle (n=442), vitrificado (Vitri n=356) e tratado com 20μg/ml de CD durante 10 a 20 minutos e vitrificado (CDVitri n=355). Para a vitrificação, os oócitos foram expostos durante 30 segundos a solução SV50 (10% EG + 10% Me2SO), seguido de 25 segundos na solução SV100 (20% EG+ 20% Me2SO + 0,5M SAC), sendo envasados em grupos de 4 a 5 em cada OPS e mergulhados em nitrogênio líquido. O aquecimento foi realizado em dois passos de 5 minutos, com gradientes de sacarose (0,26 e 0,16M). Após isso, todos os grupos foram submetidos simultaneamente aos mesmos processos de maturação, fecundação e cultivo in vitro. A viabilidade in vitro foi avaliada através das taxas de clivagem e blastocistos. Adicionalmente, a viabilidade in vivo foi avaliada pela transferência dos embriões (1 ou 2 por receptora), derivados de oócitos imaturos vitrificados, submetidos ou não a nova vitrificação no estágio de blastocisto. Não foram observadas diferenças estatísticas nas taxas de clivagem e blastocistos entre os grupos CDVitri (46,4% e 3,5%) e Vitri (49,0% e 6,1%) respectivamente, sendo ambos inferiores (P<0,05) ao grupo controle (85,1% e 45,9%). Na avaliação in vivo, obteve-se o nascimento de uma fêmea e um macho do grupo Vitri (cinco receptoras) e uma fêmea do grupo CDVitri (duas receptoras). Esses resultados permitem concluir que o pré-tratamento com citocalasina D não melhora a viabilidade embrionária de oócitos bovinos imaturos vitrificados. Entretanto, a solução de vitrificação utilizada foi eficiente para criopreservação de oócitos imaturos, com a tecnologia OPS. Os embriões derivados de oócitos imaturos vitrificados possibilitam a obtenção do nascimento de produtos normais e saudáveis, mesmo quando submetidos a nova vitrificação no estágio de blastocisto expandido.
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