Desenvolvimento de um método de análise in vitro da capacidade genomodificadora de compostos químicos e sintéticos
Fecha
2013-07-16Metadatos
Mostrar el registro completo del ítemResumen
Pelo fato do DNA ser uma molécula suscetível ao ataque muitas de
substâncias, estudos sobre efeitos tóxicos ou fitoterapêuticos de compostos
químicos são necessários. Muitos ensaios que analisam o efeito genomodificador de
substâncias, às vezes, são relativamente complexos, como o Teste do Cometa.
Entende-se por ação genomodificadora aquela em que a substância testada ou
apresenta genoproteção ou genotoxicidade. Baseado na existência de ensaios in
vitro que servem como triagem para avaliar a capacidade antioxidante de um dado
composto, como o DPPH, o objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um
método in vitro da capacidade genomodificadora de compostos químicos e
sintéticos. Assim, um ultrassensível e rápido protocolo que não utiliza sistemas
biológicos foi desenvolvido para a quantificação do DNA dupla-fita (dsDNA) exposto
a substâncias químicas, denominado de Teste GEMO (Teste de Capacidade
Genomodificadora). Esse método foi concebido para placa preta de 96 poços,
utilizando um corante altamente específico de dsDNA (PicoGreen®) e DNA
purificado de timo de bezerro (dsDNA). O teste inclui um pró-oxidante de referência,
peróxido de hidrogênio (H2O2 3M), que permite a análise comparativa dos dados
obtidos, classificando a substância testada em vários níveis de genotoxicidade e
ainda se a mesma apresenta potencial de genoproteção. Para o desenvolvimento do
teste foi utilizado um antioxidante bem conhecido pelo seu papel genoprotetor e
antitumoral, a vitamina C em diferentes concentrações (0.1, 0.3, 1, 3 e 10 μg/mL).
Para a validação do Teste GEMO, foram utilizadas células mononucleares de
sangue periférico (PBMCs) e células de adenocarcinoma colorretal (HT29), expostas
as mesmas condições que o teste proposto e submetidas a diferentes testes já bem
descritos na literatura: Teste do Cometa Alcalino, MTT, DCFH-DA e TBARS. Os
resultados mostraram alta correlação com Teste GEMO, confirmando a validação.
Portanto, o ensaio desenvolvido nesse trabalho oferece alta sensibilidade para
detectar compostos genomodificadores, sem a interferência de sistemas biológicos.