Caracterização molecular dos componentes do sistema angiotensina-(1-7) durante a divergência folicular e expressão de genes de reparo da fita dupla de DNA em embriões bovinos
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2012-02-24Metadatos
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O primeiro estudo caracterizou a expressão do receptor MAS e de enzimas responsáveis pela
produção de Ang-(1-7), tais como, enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2), endopeptidase neutra
(NEP) e prolil endopeptidase (PEP) durante o desenvolvimento folicular. Além disso, a regulação
local do sistema Ang-(1-7) foi avaliada após a injeção intrafolicular de fulvestrant (inibidor do
receptor de estradiol) no folículo dominante. As vacas foram ovariectomizadas quando o tamanho
entre o maior (F1) e o segundo maior folículo (F2) não era estatisticamente diferente (D2),
ligeiramente (D3) ou marcadamente diferente (D4). A expressão de RNAm do receptor MAS, ACE2,
NEP e PEP foi avaliada nas células foliculares do F1 e F2. O receptor MAS foi mais expresso nas
células da granulosa do F2 após o estabelecimento da divergência folicular (D4), enquanto a expressão
de PEP aumentou durante (D3) e após (D4) o processo de divergência. Entretanto, a expressão de
ACE2 foi maior nas células da granulosa do F1 durante e após a divergência. A expressão de PEP não
foi regulada no F1 e F2. O receptor MAS foi imunolocalizado nas células da teca e granulosa do F1 e
F2 durante a divergência folicular. A expressão de RNAm do receptor MAS aumentou quando o F1
foi tratado com fulvestrant in vivo. Em conclusão, o perfil de expressão do receptor MAS, ACE2, NEP
e PEP nos folículos dominante e subordinado indicam que a Ang-(1-7) apresenta uma função na
regulação da dominância folicular em bovinos. Em um segundo estudo investigamos a expressão de
genes que controlam o reparo do DNA através das vias de recombinação homóloga (HR; 53BP1,
ATM, RAD50, RAD51, RAD52, BRCA1, BRCA2, NBS1) e união terminal não homóloga (NHEJ;
KU70, KU80, DNAPK) em embriões bovinos com alta, média ou baixa competência de
desenvolvimento. Foi também avaliado se embriões bovinos podem responder a quebra na fita dupla
de DNA (DSBs), induzida por irradiação UV, através da regulação de genes envolvidos nas vias de
reparo HR e NHEJ. Embriões com alta, média ou baixa competência de desenvolvimento foram
selecionados pelo tempo de clivagem após a fertilização in vitro e foram removidos do cultivo antes
(36 h), durante (72 h) ou após (96 h) o momento esperado para a ativação do genoma embrionário
(AGE). Todos os genes foram expressos antes, durante e após a AGE independentemente da
competência de desenvolvimento dos embriões. A expressão de 53BP1 e RAD52 foi maior antes da
AGE em embriões com baixa competência de desenvolvimento. A expressão de 53BP1, RAD51 e
KU70 foi mais baixa as 72 h e maior as 168 h pós fertilização em embriões com DSBs induzida por
irradiação UV. Em conclusão, genes importantes para o controle das vias de reparo HR e NHEJ são
expressos em embriões bovinos independentemente do tempo de cultivo ou da competência de
desenvolvimento. A menor competência de desenvolvimento embrionário parece estar associada com
maior expressão de 53BP1 e RAD52. Os embriões bovinos respondem a DSBs após a AGE mas as
vias HR e NHEJ são reguladas principalmente no estágio de blastocisto.