Suscetibilidade in vitro a antifúngicos, frações de óleos essenciais e modelo experimental de infecção por Malassezia pachydermatis
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Data
2018-07-19Autor
Schlemmer, Karine Bizzi 
Primeiro orientador
Santurio, Janio Morais
Primeiro membro da banca
Alves, Sydney Hartz
Segundo membro da banca
Botton, Sônia de Avila
Terceiro membro da banca
Loreto, Érico Silva de
Quarto membro da banca
Denardi, Laura Bedin
Metadata
Mostrar registro completoResumo
Malassezia pachydermatis é uma levedura zoofílica encontrada principalmente no conduto auditivo de várias espécies de animais, podendo, também, ser isolada da pele de seres humanos. Antifúngicos azólicos e poliênicos são o tratamento de escolha para infecções de pele, relacionadas à Malassezia. No entanto, estudos têm demonstrado à ocorrência de resistência ou menor suscetibilidade desta levedura à algumas drogas. Neste contexto, este estudo teve como objetivos: avaliar a combinação in vitro de antifúngicos entre si e antifúngicos e frações de óleos essenciais (OEs), com base no protocolo M27-A3, com modificações, pelo método de “checkerboard”. Em adição buscou-se avaliar os efeitos citotóxicos do carvacrol (CRV), cinamaldeído (CIN) e timol (THY) em fibroblastos de camundongos (linhagem celular 3T3) e desenvolver um modelo de infecção experimental em camundongos para M. pachydermatis. As combinações entre antifúngicos apresentaram um predomínio de resultados indiferentes, com as maiores taxas de sinergismo para as combinações de itraconazol+caspofungina e clotrimazol+caspofungina (55,17%). As combinações de antifúngicos e frações de OEs apresentaram 80% de interações sinérgicas para as combinações de CRV + nistatina, THY + nistatina e CRV + miconazol. Nos testes de citotoxicidade utilizando o MTT ((3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina) CRV e THY não mostraram-se citotóxicos na maioria das concentrações testadas (1-50 μg / mL), mas o CIN reduziu a viabilidade celular em todas as concentrações. Houve uma diminuição nas concentrações de espécies reativas de oxigênio na presença de CRV, CIN e THY em 24 e 72 h, mas observou-se um aumento na concentração de 50 μg / mL de CIN em 24 h de incubação. Foi observado um aumento nos níveis de fragmentação do DNA nas concentrações de 50 e 100 μg / mL de CRV, 25-100 μg / mL de CIN e na maioria das concentrações de THY. Observou-se um aumento (até 5%) na apoptose após exposição a CRV e THY (25-50 μg / mL) em 24-72 h e um aumento no nível de apoptose tardia (até 90%) com CIN (25 μg / mL) em 24-72 h. Foi desenvolvido um modelo de infecção para M. pachydermatis em camundongos Swiss imunocomprometidos com ciclofosfamida (CYP) e acetato de hidrocortisona (HCA). Esse protocolo de imunossupressão já é usado em diversos estudos para facilitar infecções fúngicas experimentais. A imunossupressão prévia dos camundongos permitiu a infecção da derme e da orelha de todos os animais. Além disso, os achados histopatológicos mostraram leveduras, inflamação e hiperqueratose, confirmando otite e dermatite por M. pachydermatis. Os resultados do presente estudo mostraram algumas combinações com altos percentuais de sinergismo, as quais, permitem a elaboração de novas hipóteses de tratamento e apontam algumas combinações candidatas a serem avaliadas em modelos experimentais in vivo.
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