Desenvolvimento de uma técnica de microamostragem utilizando impregnação de sangue em papel filtro para análise de biomarcadores de zearalenona e deoxinivalenol em suínos
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Data
2025-02-21Autor
Laber, Isadora Fabris 
Primeiro orientador
Mallmann, Carlos Augusto
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A suinocultura assume um papel economicamente significativo na cadeia de produção animal, mantendo um crescimento constante por várias décadas. As micotoxinas são metabólitos fúngicos que afetam o organismo de várias maneiras prejudiciais, interferindo em diferentes processos fisiológicos e resultando em danos reprodutivos, estresse oxidativo, distúrbios endócrinos, citotoxicidade e imunotoxicidade. As toxinas zearalenona (ZEA) e deoxinivalenol (DON) são produzidas por fungos do gênero Fusarium spp. e causam grandes impactos na cadeia produtiva devido à suscetibilidade dos suínos a essas toxinas. Diferentemente da avaliação convencional de micotoxinas em ração e ingredientes, a avaliação da exposição às micotoxinas por meio de biomarcadores pode fornecer uma análise individual do consumo, bem como permitir a avaliação da eficácia de aditivos antimicotoxinas (AAM) in vivo. Portanto, esse trabalho teve como objetivo desenvolver e validar uma metodologia para avaliar biomarcadores de DON, ZEA e seus metabólitos α-zearalanol (α-ZAL), zearalanona (ZAN), deepoxy-deoxinivalenol (DOM-1) e 3-acetil-DON (3-ADON) em sangue de suínos impregnado em papel filtro qualitativo. Para o desenvolvimento e validação do método, foram utilizadas amostras de sangue coletadas em tubos EDTA no momento do abate de três suínos da raça Landrace, com 70 dias de idade, sem exposição prévia às micotoxinas. As amostras de sangue foram fortificadas com 20, 40 e 60 μg/L de um mix contendo 1.000 μg/L de DON, ZEA, α-ZAL, ZAN, DOM-1 e 3-ADON. Em seguida, 40 μL de cada concentração foram impregnados em círculos previamente demarcados em papel filtro qualitativo, em septuplicata. Após a secagem, as amostras de sangue impregnado foram recortadas, extraídas e quantificadas por HPLC-MS/MS. Os seguintes parâmetros foram avaliados para validação do método: limites de detecção e quantificação, linearidade, curva analítica, efeito matriz, recuperação e seletividade. O método foi capaz de detectar ZEA, α-ZAL, ZAN, DON, DOM-1 e 3-ADON em amostras de sangue seco (DBS). ZEA, α-ZAL, ZAN e DON atenderam a todos os parâmetros exigidos para validação do método, com recuperações médias de 89,10%, 74,66%, 79,79% e 101,50%, respectivamente. Sendo assim, o método foi validado para a análise de ZEA, α-ZAL, ZAN e DON em sangue suíno, atendendo aos critérios estabelecidos pelas autoridades regulatórias. Além disso, o papel filtro qualitativo demonstrou ser uma alternativa eficaz aos papéis de biocoleta convencionais, tornando o método mais acessível em comparação aos demais métodos já desenvolvidos.
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