Envolvimento dos receptores CysLT1 nas crises induzidas por pentilenotetrazol em camundongos, na permeabilidade da barreira hematoencefálica e na modulação da enzima na+,k+-ATPase em hipocampo
Resumo
Evidências crescentes têm mostrado que os leucotrienos são importantes contribuintes na
patofisiologia de diversas doenças inflamatórias do sistema nervoso central nas quais a
excitotoxicidade esteja envolvida, incluindo trauma crânio-encefálico, encefalite, doença de
Parkinson, isquemia, dor neuropática e epilepsia. Entretanto pouco se sabe sobre o mecanismo
molecular pelo qual os leucotrienos facilitam a atividade excitatória no encéfalo. Assim, neste
trabalho investigamos o efeito de antagonistas para receptores de leucotrienos cisteínicos
(CysLT) sobre as convulsões induzidas por PTZ em camundongos. Bay-u9973 (3 and 30 nmol),
montelucaste (0.03 and 0.3 μmol) e pranlucaste (1 and 3 μmol), aumentaram a latência para as
crises e diminuíram a amplitude média do EEG durante as crises. Montelucaste (0.03 and 0.3
μmol) preveniu a ruptura da BHE induzida pelo PTZ, e o efeito foi revertido pelo LTD4 (6 pmol).
Além disso, as doses de LTD4 (0.2 and 2 pmol) que reverteram o efeito do montelucaste nas
crises não alteraram o efeito protetor do montelucaste sobre a barreira, dissociando o efeito
anticonvulsivante do efeito protetor sobre a BHE. As análises de microscopia confocal revelaram:
1) PTZ aumentou o número de células CD45+ e IgG no córtex, evidenciando a ruptura da BHE;
2) enquanto o LTD4 (6 pmol) potencializou, o montelucaste diminuiu o efeito do PTZ sobre a
migração leucocitária. Considerando que níveis aumentados de leucotrienos e diminuição na
atividade da Na+,K+-ATPase são achados comuns em diversas condições excitotóxicas,
incluindo crises epilépticas, também investigamos o efeito do LTD4 sobre a atividade da Na+,K+-
ATPase em fatias de hipocampo de camundongos. LTD4 nas doses de 10 e 100 nM, diminuiu a
atividade das subunidades alfa 2/3 e alfa 1, respectivamente. O efeito inibitório do LTD4 na
atividade da Na+,K+-ATPase não foi reproduzido quando realizado com homogeneizado de
hipocampo, indicando que esse efeito requer a célula intacta. A fim de nos certificarmos de que o
LTD4 (10 nM) estava se ligando ao receptor CysLT1, incubamos as fatias com anticorpo anti-
CysLT1, e verificamos que, na presença do anticorpo, o LTD4 perde o efeito. Além disso,
observamos que a diminuição na atividade da Na+,K+-ATPase induzida pelo LTD4 foi revertida
pelo montelucaste (1 μM), agonista inverso dos receptores CysLT1. Neste trabalho mostramos
ainda que a ativação da PKC possivelmente esteja envolvida no efeito do LTD4 sobre a atividade
da Na+,K+-ATPase em fatias de hipocampo de camundongos, uma vez que o GF 109203X (0,3
μM), inibidor da PKC, preveniu esse efeito. Por fim, mas não menos importante, também
demonstramos que em animais injetados i.c.v. com LTD4 (2 pmol/3 μL, i.c.v.), também ocorre
uma diminuição na atividade da Na+,K+-ATPase, corroborando com nossos achados in vitro e
confirmando a importância biológica deste trabalho. Assim, este trabalho mostrou evidências do
envolvimento dos receptores CysLT1 nas crises induzidas por PTZ bem como na permeabilidade
da BHE, sendo a modulação da enzima Na+,K+-ATPase um possível mecanismo para a
implicação dos leucotrienos em diversas doenças do SNC relacionadas com inflamação e
hiperexcitabilidade.