Eixo ECA2/ANG-(1-7)/mas e sua regulação no processo de ovulação
Date
2011-02-28Metadata
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O Sistema Renina-Angiotensina (RAS) tem sido relacionado com diversas funções
reprodutivas, incluindo a cascata ovulatória. Ao contrário da Angiotensina II (AngII), a
função da Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] ainda não está caracterizada no ovário de espécies
mono-ovulares como a bovina. Este estudo teve por objetivo determinar se os diferentes tipos
celulares de folículos pré ovulatórios expressam o receptor MAS para Ang-(1-7) e a enzima
conversora de angiotensina 2 (ECA2). Além disso, foi investigado se esses genes são
induzidos por LH durante o processo ovulatório. Quarenta vacas foram sincronizadas e
aquelas que alcançaram diâmetro folicular ≥ 12 mm receberam uma aplicação IM de GnRH e
foram ovariectomizadas via colpotomia em diferentes momentos (0, 3, 6, 12 e 24 h) após o
GnRH. O líquido folicular foi recuperado para dosagem de Ang-(1-7). As células da teca e da
granulosa foram isoladas e submetidas à extração de RNA e transcrição reversa. A expressão
relativa dos genes foi realizada por PCR em tempo real. Em um segundo experimento,
utilizando um modelo in vitro de cultivo de células de folículos ≥ 12mm, buscou-se avaliar o
efeito da Ang-(1-7) ou do bloqueio de seu receptor (MAS) na expressão de RNAm para
epirregulina (Ereg). No terceiro experimento, utilizando o modelo de injeção intrafolicular in
vivo, foi testada a hipótese de que Ang-(1-7) é essencial para a ovulação em bovinos. Vinte
vacas foram sincronizadas e quando os folículos atingiram um diâmetro mínimo de 12 mm,
receberam os tratamentos com A-779 (inibidor do receptor MAS) ou solução salina 0,9%
(grupo controle) e foram no momento da injeção intrafolicular desafiados com uma aplicação
IM de análogo de GnRH. Foi detectada a presença de Ang-(1-7) no líquido folicular, sendo
que seus níveis foram constantes até 12 h após o GnRH e aumentando (P <0,05), às 24 h após
o tratamento. A expressão de RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP foi detectada em células
da teca e granulosa em todos os períodos após a aplicação de GnRH. A expressão de RNAm
para ECA2, NEP e PEP, foi regulada nas células da granulosa em diferentes momentos após
tratamento com GnRH (P <0,05). Folículos pré-ovulatórios possuem Ang-(1-7) no líquido
folicular, bem como expressam RNAm para MAS, ECA2, NEP e PEP nas células da teca e
granulosa durante o processo ovulatório. A suplementação com Ang-(1-7), ou o bloqueio de
seu receptor nas doses utilizadas não foi capaz de alterar o padrão de expressão de RNAm
para Ereg em nosso sistema de cultivo de pedaços de folículos ≥ 12 mm. A aplicação
intrafolicular de A-779 (10-5 M) não bloqueou a ovulação quando realizada antes do início do
pico esperado de LH (100% das vacas ovularam nos grupos A-779 e controle). A expressão
diferencial das enzimas formadoras da Ang-(1-7) (ECA2, NEP e PEP) nas células da
granulosa e o aumento nas concentrações Ang-(1-7) no líquido folicular próximos a ovulação
podem indicar um papel desse peptídeo na ovulação em bovinos.