Expressão e caracterização de um fragmento da glicoproteína e do herpesvírus bovino tipo 1 e uso em um teste sorológico diferencial
Resumo
O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) é um vírus de distribuição mundial e produz
grandes prejuízos econômicos em rebanhos de corte e de leite. A infecção pelo BoHV-1
produz manifestações respiratórias, reprodutivas e também pode cursar com sinais
nervosos. Existem diversos testes laboratoriais capazes de diagnosticar a infecção.
Contudo, as técnicas sorológicas empregadas atualmente não são capazes de diferenciar
anticorpos produzidos pela vacinação daqueles produzidos em resposta à infecção natural.
Assim, vacinas diferenciais com deleção da glicoproteína E (gE) têm sido desenvolvidas
com essa finalidade. No entanto, necessita-se também de testes capazes de diferenciar a
produção de anticorpos vacinais dos induzidos pelo vírus vacinal. Com essa finalidade,
essa dissertação relata a expressão e caracterização de um fragmento da glicoproteína E do
BoHV-1 e seu uso no desenvolvimento e padronização de um ELISA indireto para
detecção de anticorpos anti-gE. Um fragmento de 651 nucleotídeos correspondente ao
terço amino-terminal (217 aminoácidos) do gene da gE do BoHV-1, que possui uma alta
identidade com o homólogo herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5), foi clonado com
proteína de fusão 6xHis-tag em Escherichia coli utilizando vetor de expressão pET16b.
Uma proteína solúvel de aproximadamente 25kDa foi purificada a partir de lisados de E.
coli transformadas. A proteína recombinante foi detectada por Western blot (WB) por
anticorpos monoclonais anti-histidina e anti-gE do BoHV-1. Anticorpos presentes no soro
de animais infectados com BoHV-1 e BoHV-5 reagiram especificamente com a proteína
recombinante no WB. Além disso, camundongos imunizados com a proteína purificada
desenvolveram anticorpos que reconheceram a gE viral proveniente de lisados de
monocamadas celulares infectadas com BoHV-1 e BoHV-5. Um ELISA indireto para
detecção de anticorpos anti-gE, baseado na proteína expressa, foi capaz de diferenciar
sorologicamente animais vacinados com a cepa gE deletada do BoHV-5 dos animais
experimentalmente infectados com BoHV-1 ou BoHV-5. Esses resultados demonstram
que o antígeno obtido conservou suas características imunológicas e pode ser utilizado na
detecção sorológica das infecções por herpesvírus bovinos. Possui potencial para uso em
grande escala como antígeno em testes de ELISA para diferenciar animais naturalmente
infectados de animais vacinados com a cepas defectivas na gE