Isolamento e análise de indicadores genotóxicos em célulastronco de polpa dentária de cães
Date
2013-03-10Metadata
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Quebras na dupla-fita do DNA são consideradas uma das formas mais letais de
dano que podem comprometer a capacidade das células-tronco de se autorenovarem
ou de se diferenciarem. Portanto, estudos adicionais são
necessários para identificar biomarcadores de danos genômicos que possam
ajudar os pesquisadores a escolher as melhores linhagens celulares para
estudos e seu uso clínico veterinário. Para tanto o presente estudo teve como
objetivo implantar uma técnica de obtenção de células-tronco a partir de polpa
de dente (dental stem-cells, DSCs) de cães avaliando a taxa de proliferação
celular, a morfologia das células e a qualidade celular através de indicadores
de dano de DNA e estresse oxidativo em oito diferentes passagens de cultura
em fase indiferenciada. A escolha de obtenção de células-tronco a partir da
polpa dentária se deu por ser de fácil acesso, as células possuírem
crescimento rápido e ótimo potencial de diferenciação celular. Para avaliar a
qualidade das células em oito diferentes passagens foi feita análise da taxa de
proliferação celular, de danos no DNA por duas técnicas complementares
(Ensaio do DNA Cometa e Fragmentação do DNA por análise fluorimétrica
utilizando-se o corante Picogreen) e dos níveis de espécies reativas de
oxigênio (EROs) que causam estresse oxidativo via ensaio fluorimétrico do
DCFH-DA. Os resultados mostraram importantes diferenças entre as
passagens iniciais em relação as mais tardias. Em geral até terceira passagem
a taxa de proliferação celular foi mais alta, com menor dano genômico e
produção de EROs, sendo a segunda passagem a que apresentou melhor
qualidade. Entretanto outra questão observada foi o grande número de células
com DNA danificado observado em todas as passagens. Os resultados
sugerem que testes relativamente simples e baratos como o DNA cometa e a
análise de fragmentação do DNA podem ajudar na escolher a passagem
celular em que as células apresentam melhor qualidade genômica e funcional
tanto para as pesquisas quanto na aplicação clínica regenerativa.