Método multirresíduo para determinação de micotoxinas em vinho por UPLC-MS/MS
Abstract
Um método rápido usando cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a espectrometria de massas (UPLC-MS/MS) foi implementado e otimizado para proporcionar a determinação completa de 36 micotoxinas em amostras de vinhos. A extração foi realizada com acetonitrila, aplicando o método QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe; em português: Rápido, Fácil, Barato, Efetivo, Robusto e Seguro) modificado. Tradicionalmente, o método QuEChERS é muito conhecido na determinação de múltiplos pesticidas em uma grande variedade de matrizes de frutas e vegetais e por essa razão recebeu a distinção de método oficial da AOAC (Association of Official Agricultural Chemists) (LEHOTAY et al., 2005; BANERJEE et al., 2009). Normalmente, as determinações de micotoxinas são realizadas por cromatografia líquida após purificação em coluna de imunoafinidade ou testes ELISA, porém, essas técnicas possuem a desvantagem de envolver a determinação individual dos analitos (SPANJER et al., 2008; CUNHA et al., 2009). O objetivo deste estudo foi otimizar e empregar o método QuEChERS no procedimento de extração para determinação de micotoxinas em amostras de vinho.
Durante o estudo, foram realizados experimentos de otimização para melhorar a recuperação e estabilidade dos analitos. Além da avaliação do volume da amostra de vinho tinto a ser empregado, foi estudado o efeito do pH, realizado pela adição de uma etapa de tamponamento com formiato de amônio e ácido fórmico. Esse método envolveu uma etapa de purificação do extrato por dSPE, avaliando o uso de vários adsorventes. As micotoxinas foram analisadas por UPLC-MS/MS, usando ionização por eletronebulização no modo positivo. As soluções padrão de micotoxinas foram preparadas e classificadas em três diferentes grupos, com faixas de concentração diferentes. O estudo de recuperação foi realizado em três diferentes níveis de fortificação, com seis replicatas (n=6) em cada concentração. Outros parâmetros avaliados da validação foram linearidade (r2) das curvas analíticas, exatidão (% de recuperação), limites de detecção e de quantificação do método (LOQ e LOD, respectivamente), precisão (RSD%) e efeito matriz (%), determinados individualmente para cada micotoxina. Das 36 micotoxinas analisadas por UPLC-MS/MS (ESI+), 35 apresentaram recuperação percentual entre 70-120% e 88% apresentaram RSD ≤ 20% no menor nível de fortificação estudado (Grupo I = 1, Grupo II = 50 e Grupo III = 10 μg kg-1). O LOQ do método para 86% das micotoxinas foi o nível mais baixo estudado. O efeito matriz observado foi inferior a ±20% para 75% das micotoxinas. Este método foi aplicado satisfatoriamente na análise de 56 amostras de vinho tinto adquiridos na cidade de Amsterdã (Holanda), provenientes de diversos países.