Desenvolvimento de um método de análise in vitro da capacidade genomodificadora de compostos químicos e sintéticos
Resumo
Pelo fato do DNA ser uma molécula suscetível ao ataque muitas de
substâncias, estudos sobre efeitos tóxicos ou fitoterapêuticos de compostos
químicos são necessários. Muitos ensaios que analisam o efeito genomodificador de
substâncias, às vezes, são relativamente complexos, como o Teste do Cometa.
Entende-se por ação genomodificadora aquela em que a substância testada ou
apresenta genoproteção ou genotoxicidade. Baseado na existência de ensaios in
vitro que servem como triagem para avaliar a capacidade antioxidante de um dado
composto, como o DPPH, o objetivo deste estudo foi desenvolver e validar um
método in vitro da capacidade genomodificadora de compostos químicos e
sintéticos. Assim, um ultrassensível e rápido protocolo que não utiliza sistemas
biológicos foi desenvolvido para a quantificação do DNA dupla-fita (dsDNA) exposto
a substâncias químicas, denominado de Teste GEMO (Teste de Capacidade
Genomodificadora). Esse método foi concebido para placa preta de 96 poços,
utilizando um corante altamente específico de dsDNA (PicoGreen®) e DNA
purificado de timo de bezerro (dsDNA). O teste inclui um pró-oxidante de referência,
peróxido de hidrogênio (H2O2 3M), que permite a análise comparativa dos dados
obtidos, classificando a substância testada em vários níveis de genotoxicidade e
ainda se a mesma apresenta potencial de genoproteção. Para o desenvolvimento do
teste foi utilizado um antioxidante bem conhecido pelo seu papel genoprotetor e
antitumoral, a vitamina C em diferentes concentrações (0.1, 0.3, 1, 3 e 10 μg/mL).
Para a validação do Teste GEMO, foram utilizadas células mononucleares de
sangue periférico (PBMCs) e células de adenocarcinoma colorretal (HT29), expostas
as mesmas condições que o teste proposto e submetidas a diferentes testes já bem
descritos na literatura: Teste do Cometa Alcalino, MTT, DCFH-DA e TBARS. Os
resultados mostraram alta correlação com Teste GEMO, confirmando a validação.
Portanto, o ensaio desenvolvido nesse trabalho oferece alta sensibilidade para
detectar compostos genomodificadores, sem a interferência de sistemas biológicos.