dc.creator | Cardoso Júnior, Clóvis Dervil Appratto | |
dc.date.accessioned | 2019-07-29T21:59:06Z | |
dc.date.available | 2019-07-29T21:59:06Z | |
dc.date.issued | 2016-03-30 | |
dc.identifier.uri | http://repositorio.ufsm.br/handle/1/17602 | |
dc.description.abstract | The streptokinase (STK) is a secreted and isolated molecule of β-hemolytic streptococci,
consists of 414 amino acids and clinically indicated as a thrombolytic agent for myocardial
infarction, deep vein thrombosis, pulmonary embolism, acute or subacute peripheral arterial
thrombosis. Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) and size exclusion liquid
chromatography (SE-LC) methods were developed and validated for the assessment of STK
in biopharmaceutical formulations. A RP-LC method was carried out on a Jupiter C4 column
(250 mm x 4.6 mm i.d.), Phenomenex, maintained at 25°C. The mobile phase consisted of 50
mM sodium sulphate buffer pH 7.0 and methanol (90:10, v/v), run isocratically at a flow rate
of 0.8 mL/min. The SE-LC method was carried out on a Protein KW-802.5 column (300 mm
x 8.0 mm i.d.), Shodex, maintained at 25°C. The mobile phase consisted of 40 mM sodium
acetate buffer pH 7.0, run isocratically at a flow rate of 1.0 mL/min. Chromatographic
separation was obtained with retention times of 19.3 min, and 14.1 min, and was linear over
the concentration range of 85 - 25 000 IU/mL (R2 = 0.9999) and 600 – 8 000 IU/mL (R2 =
0.9991), respectively, for RP-LC and SE-LC, with photodiode array (PDA) detection at 220
nm and 204 nm. The limits of detection and quantification were 26 and 85 IU/mL,
respectively, for the RP-LC and 190 and 600 IU/mL, for the SE-LC. Specificity was
established in degradation studies, which also showed that there was no interference of the
excipients. Equally, the accuracy was 100.24% and 99.88%, with bias lower than 0.99% and
0.62%. The validated methods were applied to the determination of STK, and related and
higher molecular weight proteins in biopharmaceutical formulations, giving higher mean
differences of the estimated content/potencies of 0.46% and 0.53% for the RP-LC and SE-LC
related to the chromogenic bioassay, respectively. It is concluded that represents a
contribution to establish new alternatives to monitor stability, quality control and thereby
assure therapeutic efficacy of the biological medicine. | eng |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES | por |
dc.language | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de Santa Maria | por |
dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International | * |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ | * |
dc.subject | Estreptoquinase | por |
dc.subject | Cromatografia líquida | por |
dc.subject | Validação | por |
dc.subject | Bioensaio | por |
dc.subject | Correlação | por |
dc.subject | Streptokinase | eng |
dc.subject | Liquid chromatography | eng |
dc.subject | Validation | eng |
dc.subject | Bioassay | eng |
dc.subject | Correlation | eng |
dc.title | Validação de métodos cromatográficos para avaliação de estreptoquinase e correlação com o bioensaio | por |
dc.title.alternative | Validation of chromatography methods for the evaluation of streptokinase and correlation with the bioassay | eng |
dc.type | Dissertação | por |
dc.description.resumo | A estreptoquinase (STK) é uma molécula secretada e isolada de estreptococos β-hemolíticos,
constituída de 414 aminoácidos e clinicamente indicada como agente trombolítico para o
infarto agudo do miocárdio, trombose venosa profunda, embolia pulmonar, trombose arterial
periférica aguda ou subaguda. No presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos
por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) e por exclusão molecular (CL-EM) para a
avaliação de STK em formulações de produtos biofarmacêuticos. No método por CL-FR foi
utilizada coluna Jupiter C4 (250 mm x 4,6 mm d.i.), Phenomenex, mantida a 25ºC. A fase
móvel A foi constituída por tampão sulfato de sódio 50 mM, pH 7,0, e a fase móvel B por
metanol (90:10, v/v), eluída sob fluxo isocrático de 0,8 mL/min. No método por CL-EM foi
utilizada coluna Protein KW-802.5 (300 mm x 8,0 mm d.i.), Shodex, mantida a 25ºC. A fase
móvel foi constituída de tampão acetato de sódio 40 mM, pH 7,0, eluída em vazão isocrática
de 1,0 mL/min. Utilizou-se detector de arranjo de diodos (DAD) a 220 nm e 204 nm, para
CL-FR e CL-EM, respectivamente. A separação cromatográfica foi obtida nos tempos de 19,3
min e 14,1 min, sendo linear na faixa de concentração de 85 - 25 000 UI/mL (R2 = 0,9999) e
600 – 8 000 UI/mL (R2 = 0,9991), respectivamente, para os métodos por CL-FR e CL-EM. Os
limites de detecção e quantificação foram 26 e 85 UI/mL, respectivamente, para o método por
CL-FR e 190 e 600 UI/mL por CL-EM. A especificidade foi avaliada em estudos de
degradação, e demonstrou-se também que não houve interferência dos excipientes. A exatidão
foi 100,24% e 99,88%, com bias inferior a 0,99% e 0,62%, respectivamente, para os métodos
por CL-FR e CL-EM. Os métodos propostos foram aplicados para a avaliação da potência de
STK, de formas degradadas ou alteradas, de proteínas relacionadas e de alta massa molecular
em formulações biofarmacêuticas, e os resultados foram comparados com o bioensaio
cromogênico, observando-se diferenças das médias de teor/potência 0,46% e 0,53%
superiores para os métodos por CL-FR e CL-EM, respectivamente. Concluiu-se que o
trabalho representa contrbuição para estabelecer novas alternativas para monitorar a
estabilidade e o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica do
produto biotecnológico. Do mesmo modo, também estabelecem bases para estudos de
comparabilidade de biomoléculas, garantindo a segurança e eficácia. | por |
dc.contributor.advisor1 | Dalmora, Sergio Luiz | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4505166045049607 | por |
dc.contributor.referee1 | Vaucher, Lauren Rosa Crossetti | |
dc.contributor.referee1Lattes | http://lattes.cnpq.br/7468913314581754 | por |
dc.contributor.referee2 | Rocha, Andréa da Silva Ramos | |
dc.contributor.referee2Lattes | http://lattes.cnpq.br/1207655504558175 | por |
dc.creator.Lattes | http://lattes.cnpq.br/6041086096872362 | por |
dc.publisher.country | Brasil | por |
dc.publisher.department | Análises Clínicas e Toxicológicas | por |
dc.publisher.initials | UFSM | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas | por |
dc.subject.cnpq | CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::FARMACIA | por |
dc.publisher.unidade | Centro de Ciências da Saúde | por |