Avaliação de potência/teor de toxina botulínica tipo a por métodos cromatográficos e bioensaios
Fecha
2018-07-24Primeiro membro da banca
Matter, Leticia Beatriz
Segundo membro da banca
Maldaner, Fernanda Pavani Stamm
Metadatos
Mostrar el registro completo del ítemResumen
A toxina botulínica tipo A (BoNTA) é um dos 7 diferentes sorotipos de toxinas, produzidas através de processo de fermentação com Clostridium botulinum, sob condições anaeróbicas. O produto biotecnológico tem sido utilizado nas áreas terapêutica e cosmética, para inibir a hipercontração muscular e hipersecreção glandular. No presente trabalho foi desenvolvido e validado método por cromatografia líquida por exclusão molecular (CL-EM) para a avaliação de BoNTA em formulações de produtos biofarmacêuticos. Foi utilizada coluna TSKgel® G3000 SWXL (300 mm x 7,8 mm d.i.) mantida a 25 ºC. A fase móvel foi constituída por fosfato de potássio 50 mM, pH 7,0, eluída em vazão isocrática de 1,0 mL min-1 e com detecção por arranjo de diodos (DAD) em 220 nm. O tempo de retenção da BoNTA foi de 13,5 min. A curva de calibração foi linear na faixa de concentração de 0,29 – 100 U mL-1 (r2 = 0,9998) e os limites de detecção e quantificação foram de 0,08 e 0,29 U mL-1, respectivamente. A especificidade foi verificada e confirmada por estudos de degradação forçada, avaliação da interferência dos excipientes da formulação e pureza dos picos. A média da exatidão foi de 100,41%, com erro relativo inferior a 0,93. O método por CL-EM foi aplicado para determinação de teor/potência e das proteínas de alta massa molecular de BoNTA e os resultados foram comparados com os obtidos por cromatografia líquida em fase reversa, previamente validado, com o ensaio por cultura de células T–47D in vitro e o bioensaio da DL50 in vivo observando-se diferenças das médias de teor/potência 0,87% superior, 0,36% inferior e 0,71% superior, respectivamente. As formas agregradas apresentaram redução significativa da atividade biológica e efeitos de citotoxicidade in vitro (p < 0,05). Neste contexto, é infatizada a pesquisa de métodos alternativos de acordo com os 3 Rs e contribuiu-se para estabelecer procedimentos para avaliar a qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica do produto biotecnológico.
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