Detecção e descontaminação de Mycoplasma spp. em cultivos celulares e cepas virais
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Date
2024-02-28Primeiro membro da banca
Anziliero, Deniz
Segundo membro da banca
Monteiro, Francielle Liz
Metadata
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Os Mycoplasma spp. são bactérias pertencentes à classe dos Mollicutes, considerados
os menores organismos com capacidade de autorreplicação (0,15 – 0,3 μm) e sem parede celular
definida. São associados com infecções em animais e humanos, e se constituem em frequentes
contaminantes de cultivos celulares e produtos biológicos. Essa alta frequência se deve ao fato
de que esses microrganismos são resistentes à maioria dos antimicrobianos utilizados em
cultivos celulares, não causam alterações passíveis de observação ao microscópio ótico nos
cultivos e, muitas vezes, não são detectados por testes convencionais. No entanto, a
contaminação de cultivos celulares por micoplasmas pode interferir em vários aspectos da
fisiologia e metabolismo celular e, assim, interferir com os resultados e qualidade dos produtos
obtidos a partir desses cultivos. Assim, o presente trabalho teve como objetivos investigar a
contaminação por Mycoplasma spp. em cultivos celulares e cepas virais utilizadas no Setor de
Virologia da Universidade Federal de Santa Maria e, uma vez detectada, avaliar drogas e
protocolos de descontaminação. Dentre 25 linhagens celulares e cultivos primários testados
para Mycoplasma spp. por PCR, 16/25 (64%) foram positivos, e quanto as cepas virais, 13/13
(100%), estavam contaminadas, sendo três de vírus da diarreia viral bovina 1 (BVDV-1), duas
de BVDV-2, uma de HoBi-like virus (HobiPeV), quatro de herpesvírus bovino 1 (BoHV-1),
uma de BoHV-2, BoHV-5 e vírus da parainfluenza bovina 3 (PI-3V). A seguir, Plasmocin®
[P] e gentamicina [G] foram testadas isoladamente ou em conjunto, para a descontaminação de
linhagens celulares de bovinos (MDBK e CRIB), suíno (PK-15), de coelho (RK-13) e de
hamster (BHK-21). Esses cinco cultivos foram submetidos ao protocolo de descontaminação e
testados semanalmente para Mycoplasma spp. através de PCR. A descontaminação só foi
possível a partir de 35 dias de tratamento, sendo que o tratamento combinado P + G foi efetivo
em eliminar o Mycoplasma spp. de três linhagens (PK -15, BHK – 21 e RK -13) com 35 dias
de tratamento, e na linhagem MDBK com 42 dias. O tratamento somente com Plasmocin®
descontaminou a linhagem RK – 13 com 35 dias de tratamento, e a MDBK com 42 dias. Já o
tratamento com a gentamicina isolada somente foi efetivo em descontaminar a linhagem RK –
13 a partir de 35 dias de tratamento. Uma linhagem celular (CRIB) não pode ser
descontaminada mesmo após 70 dias de tratamento combinado P + G. Também foi investigada
a contaminação em lotes de soro fetal bovino (SFB), sendo que dos 12 lotes comerciais testados,
todos deram negativos para Mycoplasma spp. através de PCR. A seguir realizou-se o protocolo
de descontaminação das cepas virais. Esse protocolo consistia em ciclos de amplificação viral
em cultivo celular, centrifugação da suspensão (14,000 RPM por 15 min.), filtração (0,1 ou
0,22μm), diluição limitante e cultivo em células livres de Mycoplasma spp. na presença de P +
G. As 13 cepas virais foram descontaminadas com sucesso após 1 a 4 ciclos de
descontaminação. Assim, o presente trabalho detectou a contaminação frequente de cultivos
celulares e cepas virais com Mycoplasma spp. e realizou, com sucesso, a descontaminação
desses insumos biológicos.
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