Expressão de genes de mediadores citotóxicos por CMSP tratadas com pastas endodônticas indicadas para dentes decíduos
Fecha
2015-08-14Metadatos
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Pastas iodoformadas (PI) e a base de hidróxido de cálcio (PH) são empregadas na pulpectomia de dentes decíduos, complementando a ação antimicrobiana do preparo químico mecânico e favorecendo o reparo tecidual. Essas pastas ocupam e permanecem por um período de tempo ao longo do canal radicular, entrando em contato com a região periapical e tecidos adjacentes, tornando-se o objetivo deste estudo quantificar a expressão relativa de genes de toxicidade manifestados pelas pastas, de forma a avaliar a biocompatibilidade das mesmas. Pelo ensaio RT-PCR, foram analisados mecanismos celulares induzidos ou gerados por extratos das pastas endodônticas: PI com Nebacetin (PNEB); com Maxitrol (PMAX); com Clorexidina (PCHX); e Guedes-Pinto (PGP); e PH: Calen® espessada com Oxido de Zinco (Calen®/ZOE); e pasta de Hidróxido de Cálcio com Clorexidina (PHCHX); Ultracal®XS, frente às células mononucleares do sangue periférico humano (CMSP), de forma a quantificar a expressão gênica relativa dos mediadores citotóxicos: Granzima A, Granzima B, Granulisina e Perforina. Previamente à expressão gênica, para analisar aspectos da viabilidade celular, foram realizados ensaios MTT, LDH e atividade de Caspases. Após teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov, os resultados foram tratados por ANOVA de uma via e Tukey, com p<0,05. A PNEB foi a única pasta que expressou todos os mediadores citotóxicos avaliados (p<0.05). Com relação à viabilidade celular, a PNEB apresentou aumento de Caspases 1 e 8 (p<0.05); A PGP levou ao aumento das Caspases 1, 3 e 8 (p<0.05); A PCHX diminuiu a viabilidade celular no MTT e LDH, além de apresentar aumento da atividade de todas as Caspases (p<0.05). Nas PH, somente a Ultracal®XS apresentou valores de concentração significativos para Caspase 1, 3 e 8 (p<0.05). Apesar da PNEB ter apresentado elevada expressão gênica relativa de todos os mediadores citotóxicos analisados, não causou diminuição da viabilidade celular, não ocasionando aumento da atividade da Caspase 3 (efetora da apoptose), demonstrando biocompatibilidade. Dentre as PI que apresentaram melhor biocompatibilidade sob o aspecto de citotoxicidade foram a PGP e PMAX. O material com potencial citotóxico verificado neste experimento foi a PCHX, pois diminuiu drasticamente a viabilidade celular, confirmada em dois ensaios e corroborada pela alta atividade de todas as Caspases analisadas, e ainda, devido à morte celular, a incapacidade de expressão gênica. Todas as PH desempenharam comportamento citocompatível, de acordo com os ensaios realizados e à luz da biologia molecular.