Proteínas ligantes dos receptores de fatores de crescimento em complexo cumulus-oócito bovino
Date
2011-08-31Metadata
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O objetivo do presente trabalho foi caracterizar as proteínas Grb10 e Grb14 em
complexos cumulus-oócito (CCOs) de bovinos oriundos de folículos em diferentes fases de
desenvolvimento e mostrar o envolvimento do estradiol na regulação da expressão de RNAm.
Primeiramente, foram obtidos pool de CCOs de folículos de 3-8mm para verificar a expressão
de RNAm para Grb10 e Grb14 no oócito desnudo e nas células do cumulus. Tanto o oócito
quanto as células do cumulus expressaram RNAm para as proteínas em estudo. Com o intuito
de caracterizar o modelo experimental utilizado, foi verificado que a competência à
progressão meiótica se da em oócitos oriundos de folículos com diâmetro >2mm (P<0,01) e
aumenta ao longo do desenvolvimento folicular, já que, oócitos oriundos de folículos de 1-3 e
4-6mm apresentam taxas de maturação inferiores aos oócitos oriundos de folículos de 6-8 e
>8mm (P<0,05). O primeiro experimento foi delineado com o intuito de demonstrar uma
expressão diferencial de mRNA para as proteínas Grb10 e Grb14 ao longo do
desenvolvimento folicular. Para isso os grupos de CCOs (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) foram
submetidos a extração RNA e transcrição reversa. A expressão relativa dos genes foi realizada
por PCR em tempo real. Nesse experimento foi verificado que a expressão do gene Grb10 em
CCOs esteve elevada nos grupos 1-3 e 4-6mm, diminuindo nos grupos 6-8 e >8mm (P<0,05).
Já a expressão de mRNA de Grb14 esteve alta no grupo 1-3, diminuindo (P<0,05) conforme o
aumento do tamanho folicular. Além disso, foi realizada a localização da proteína Grb10 pela
técnica de imunofluorescência. A proteína Grb10 foi localizada tanto no oócito como no
cumulus dos grupos de CCOs (1-3, 4-6, 6-8 e >8mm) porém a localização foi mais evidente
em CCOs oriundos de folículos com diâmetro <6mm. Com o intuito de identificar uma
influência hormonal na regulação da expressão de Grb10 e Grb14, foi realizado um terceiro
experimento no qual CCOs oriundos de folículos de 3-8mm foram co-cultivados com metades
foliculares em meio suplementado com estradiol-17β e/ou fulvestrant (antagonista do
estradiol) durante 6h. A expressão de RNAm não apresentou diferença significativa entre os
tratamentos (P>0,05). Com base nesses resultados pode-se concluir que há expressão de
RNAm para Grb10 e Grb14 bem como localização da proteína Grb10 em CCOs de bovinos, e
que a expressão diferencial de RNAm sugere um envolvimento desses genes na aquisição de
competência oocitária ao longo do desenvolvimento folicular. Portanto novos estudos
precisam ser feitos para entender um mecanismo de regulação na expressão de RNAm.