Perfil das células germinativas após degeneração testicular induzida pelo busulfan
Resumo
Apesar de amplamente utilizado em estudos de cinética das células-tronco
espermatogoniais ou em estudos de infertilidade masculina, não se sabe ao certo quais efeitos
o quimioterápico busulfan exerce, de fato, sobre as células germinativas masculinas e em
diferentes linhagens e espécies animais. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi analisar os
danos causados pelo busulfan na espermatogênese de camundongos machos de duas linhagens
distintas, através do perfil de expressão de RNAm dos marcadores moleculares
espermatogoniais, análises de motilidade, vigor e morfologia espermática, histopatologia do
epitélio germinativo e teste de recuperação de fertilidade. Os animais receberam uma única
dose de 40 mg/kg de busulfan ou do veículo. Após 30 dias da aplicação do fármaco, os
camundongos foram pesados, anestesiados e tiveram um dos testículos e epidídimo
cirurgicamente removidos. Este procedimento não acarretou dano algum ao outro testículo,
uma vez que camundongos que tiveram um testículo e epidídimo removidos foram capazes de
gerar prole após o período de recuperação cirúrgica. A partir destes testículos, foram avaliadas
tanto características histológicas quanto a expressão de RNA mensageiro de marcadores de
células-tronco espermatogoniais (SSC). Outros parâmetros avaliados foram a motilidade,
vigor e morfologia espermática, a partir da recuperação dos espermatozoides da cauda do
epidídimo. Passados 90 dias da aplicação inicial do fármaco, os camundongos foram
novamente pesados e anestesiados, e tiveram o outro testículo removido para as mesmas
análises. Sendo assim, as análises referentes aos 30 e aos 90 dias pertencem aos mesmos
animais, minimizando a variação da resposta individual entre os períodos analisados. Foi
observado que para a linhagem Balb/C, independente do período analisado, os animais
tratados com busulfan apresentaram uma severa degeneração testicular, com perda de célulastronco
espermatogoniais, diminuição de motilidade e vigor espermáticos e aumento no
número de espermatozoides defeituosos. Com relação à expressão gênica, foi observada uma
marcada redução na expressão do gene Nanos2, e aumento da expressão dos genes Gdnf e
Plzf. Para os animais da linhagem Swiss, foi observado que aos 30 dias após a aplicação do
fármaco, os resultados foram semelhantes aos obtidos para a linhagem Balb/C, com exceção
da expressão gênica, a qual não apresentou variação. Porém, noventa dias após a
administração do fármaco, esses animais apresentaram epitélio germinativo quase normal,
com linhagem espermatogênica, aumento na massa testicular e epididimal, aumento na
motilidade e vigor espermáticos e aumento na quantidade de espermatozoides normais, não
diferindo dos animais do grupo controle. Além disso, essa melhora foi comprovada através da
obtenção de prole após o acasalamento com fêmeas virgens, sendo que os machos utilizados
neste teste não foram submetidos ao processo de remoção dos testículos. Esses resultados
demonstram a variação do efeito do busulfan em duas linhagens distintas de camundongos,
sendo o fármaco eficiente para causar degeneração testicular severa por mais de 90 dias na
linhagem Balb/C, porém não na linhagem Swiss, provavelmente devido as variações genéticas
entre as duas linhagens.