Avaliação, in vitro, dos parâmetros cinéticos da enzima acetilcolinesterase cerebral de ratos frente a alguns compostos azóis
Resumo
A enzima acetilcolinesterase é responsável pela hidrólise de acetilcolina na
fenda sináptica durante a transmissão do impulso nervoso. A investigação de novos
inibidores dessa importante enzima é de grande relevância na tentativa de minimizar
os efeitos causados por danos na transmissão colinérgica, principalmente em
patologias como a doença de Alzheimer. Frente a isto, este trabalho investigou o
potencial inibitório de diferentes classes de compostos heterocíclicos (pirazóis,
isoxazóis e isoxazolinonas), in vitro, sobre a atividade da enzima acetilcolinesterase
de diferentes estruturas cerebrais de ratos (córtex, estriado e hipocampo). Dos onze
compostos testados, apenas o denominado aqui como 2c, foi o único a não
apresentar inibição significativa da enzima em nenhuma estrutura testada; todos os
dez compostos restantes apresentaram inibição significativa (p< 0,05), sendo que os
compostos 2a e 3c, por possuírem maior eficácia inibitória (53 e 59%,
respectivamente) foram os compostos selecionados para os ensaios de cinética
enzimática. A partir destes ensaios foi possível a caracterização dos parâmetros
cinéticos (Km e VMÁX) e do tipo de inibição apresentada por cada composto através
da plotagem dos dados em gráficos de Lineweaver-Burk e Cornish-Bowden, sendo
que os parâmetros citados encontrados para o composto 2a foram: Km = 0,2 mM e
VMÁX = 7,94 μmoles ASCh/h/mg de proteína. O composto apresentou inibição
competitiva com um Ki = 1,46 mM. Já o composto 3c apresentou valores de Km e
VMÁX iguais a 0,05 mM e 1,42 μmoles ASCh/h/mg de proteína, respectivamente. A
inibição exercida por este composto foi do tipo não-competitiva com Ki = 2,2 mM.
Todos os compostos foram diluídos em metanol PA, nas concentrações de 0,031;
0,062; 0,125; 0,250 e 0,500 mM. Os compostos selecionados para os ensaios de
cinética enzimática foram diluídos também em metanol PA, nas concentrações de
0,125; 0,250; 0,500 e 1,0 mM.