Estudos analíticos para caracterização e avaliação de interleucina-11 humana recombinante
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Date
2015-12-04Author
Souto, Ricardo Bizogne 
Primeiro orientador
Dalmora, Sergio Luiz
Primeiro membro da banca
Santos, Roberto Christ Vianna
Segundo membro da banca
Bajerski, Lisiane
Terceiro membro da banca
Silva, Carine Viana
Quarto membro da banca
Manfron, Melânia Palermo
Metadata
Show full item recordAbstract
A interleucina 11 (IL-11) é uma citocina endógena que estimula diretamente a proliferação de células tronco-hematopoiéticas e progenitoras megacariocíticas e induz o amadurecimento megacariocítico. Com os avanços na área da biotecnologia, especialmente com o advendo da tecnologia do DNA recombinante, possibilitou-se a expressão do gene da IL-11 em Escherichia coli, e assim a produção em grande escala da interleucina-11 humana recombinante (rhIL-11), a qual é clinicamente indicada, principalmente, para a prevenção de trombocitopenia grave e redução da necessidade de transfusões de plaquetas após quimioterapia mielossupressiva em pacientes com neoplasias malignas não mielóides com alto risco de trompocitopenia grave. Neste trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por eletroforese capilar de zona (ECZ) e cromatografia líquida por exclusão molecular (CL-EM) para a avaliação de rhIL-11 em produtos biofarmacêuticos. No método por ECZ, utilizou-se capilar de sílica fundida (40 cm de comprimento efetivo x 50 μm d.i.) e solução eletrolítica composta de 50 mM de fosfato de sódio dihidrogenado, pH 3,0. O capilar foi mantido a temperatura de 25ºC, e a tensão aplicada foi de 20 kV. O tempo de injeção foi de 45 s, com pressão de 50 mBar, e detecção por arranjo de diodos (DAD), em 196 nm. Para o método por CL-EM utilizou-se coluna BioSep-SEC-s-2000 (300 mm x 7,8 mm d.i.), mantida a 30ºC. A fase móvel foi constituída de tampão ácido 2-(N-morfolino)etanosulfônico 0,02 M e cloreto de sódio 0,5 M, pH 6, com vazão isocrática de 0,9 mL/min., por detector DAD em 220 nm. A rhIL-11 foi eluída nos tempos de 10,31 e 8,12, sendo linear na faixa de concentração de 1-300 μg/mL (r2 = 0,9992) e 1-200 μg/mL (r2 = 0,9996), respectivamente, para o método por ECZ e por CL-EM. Os limites de detecção e quantificação foram 0,21 e 1,0 μg/mL, para o método por ECZ e 0,23 e 1,0 μg/mL por CL-EM. A especificidade dos métodos foi verificada e confirmada por estudos de degradação e de interferência dos excipientes. A exatidão foi 100,37 e 99,81%, com bias inferior a 1,13 e 0,43%, respectivamente, para os métodos por ECZ e CL-EM. Além disso, realizou-se o teste de citotoxicidade in vitro das formas degradadas, apresentando, para as amostras submetidas às condições ácidas e fotolíticas, diferença significativa (p< 0,05) em relação à molécula íntegra. Os métodos propostos foram aplicados para a avaliação do teor/potência e dos produtos de degradação de rhIL-11 em formulações biofarmacêuticas, e os resultados foram correlacionados com o método validado por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) e bioensaio em células TF-1, apresentando correlação significativa (p> 0,05). Assim, sugere-se que os métodos desenvolvidos e validados por ECZ e CL-EM sejam aplicados para aprimorar o controle da qualidade do produto biotecnológico de rhIL-11, contribuindo, desse modo, para garantir sua segurança e eficácia terapêutica.
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