Determinação de compostos fenólicos como marcadores analíticos em extratos de plantas medicinais da Amazônia por UHPLC-ESI-MS/MS
Abstract
Um método para separação, identificação e quantificação de 24 compostos fenólicos utilizando
cromatografia líquida de ultra-alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial
(UHPLC-MS/MS) foi desenvolvido e validado. Seis espécies vegetais originárias da região
amazônica brasileira e tradicionalmente utilizadas como plantas medicinais pela população
local foram estudadas (Mansoa alliacea, Bauhinia variegata var. variegata, Bauhinia variegata
var. alboflava, Connarus perrottetii var. angustifolius, Cecropia obtusa e Cecropia palmata).
Os analitos foram separados por uma coluna de fase reversa SB-C18 (2,1 × 50 mm, 1,8 μm)
utilizando um gradiente de eluição composto por ácido acético 0,1% em água (v/v) e
acetonitrila, a uma vazão constante de 0,8 mL min-1. O limite de detecção variou entre 0,5 e
130,3 μg kg-1. A repetibilidade e a precisão intermediária apresentaram resultados satisfatórios
e as recuperações obtidas para os 24 analitos variaram entre 91,7 e 123,8% para as matrizes
avaliadas. Ademais, um estudo sistemático das várias fontes de supressão iônica em análises
por UHPLC-MS/MS foi realizado para os 24 compostos fenólicos em extratos das seis plantas
medicinais. As contribuições para a supressão iônica global do método foram avaliadas pela
ótica dos efeitos de matriz, dos aditivos de fase móvel, da coeluição de analitos e da competição
por cargas elétricas durante a ionização. Neste âmbito, a influência dos aditivos de fase móvel
sobre a eficiência de ionização mostrou-se muito pronunciada, onde efeitos de supressão iônica
de aproximadamente 90% e efeitos de enriquecimento iônicos maiores que 400% puderam ser
observados. Os efeitos negativos causados pela escolha errônea de padrões internos em estudos
de quantificação foram também avaliados e discutidos a partir da perspectiva da supressão
iônica. Este trabalho também mostrou a importância de se realizar estudos com tal abordagem
mesmo para matrizes muito semelhantes, como variedades de uma mesma espécie vegetal,
tendo em vista os diferentes efeitos de supressão iônica observados entre matrizes, para um
mesmo analito. Além disso, ensaios de quantificação dos 24 analitos foram realizados pelo
método de adição do padrão (r > 0,99) utilizando dados adquiridos pelo modo de
monitoramento de reações selecionadas (SRM). Rutina, apigenina e os ácidos vanílico, cafeico,
p-cumárico, ferúlico e trans-cinâmico foram determinados em todas as plantas estudadas em
pelo menos um dos extratos analisados. Deve ser destacado o alto conteúdo de rutina nas
variedades de Bauhinia variegata (até 2,52 mg g-1 de planta), ácido clorogênico em espécies do
gênero Cecropia (até 0,57 mg g-1 de planta) e catequina em Connarus perrottetii var.
angustifolius (1,77 mg g-1 de planta). Possíveis marcadores analíticos e potenciais marcadores
ativos para controle de qualidade de medicamentos fitoterápicos foram designados para cada
espécie vegetal estudada.
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