Interferon tipo I produzido por embriões in vitro na sinalização endócrina anterior ao período clássico de reconhecimento materno da gestação em bovinos
Abstract
O período de reconhecimento materno da gestação em bovinos caracteriza-se por ser o
processo pelo qual o concepto, através da produção de interferon-tau (IFNT) sinaliza sua
presença no útero materno. O IFNT tem como principal função manter o corpo lúteo
produzindo progesterona necessária para o estabelecimento e manutenção da gestação. O
concepto secreta vesículas extracelulares que carreiam proteínas responsáveis pela sinalização
entre o embrião e organismo materno no período de pré-implantação. Ainda, vesículas
extracelulares secretadas pelo endométrio de bovinos entram no trofectoderma do concepto e
estimulam a produção de IFNT. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar se o IFNT
secretado por embriões produzidos in vitro (FIV) é capaz de mimetizar a sinalização
endócrina em cultivo de células luteais e identificar se essa comunicação mediada pelo IFNT
ocorre na forma de proteína livre ou via exossomo. No experimento 1 foi avaliada a
capacidade do cultivo primário de células luteais de responder ao interferon tipo I. A
expressão de ISG15 aumentou de uma maneira dose-dependente atingindo o platô quando as
células luteais foram tratadas com 10ng/ml de interferon-alfa. No experimento 2, células
luteais tratadas com meio condicionado por embriões ativados partenogeneticamente
(paSOF) cultivados até os 12 dias de desenvolvimento, apresentaram um aumento na
expressão de RNAm para ISG15 quando comparados com os grupos que receberam paSOFD7
e paSOFD9. No ensaio antiviral foi detectada uma maior atividade de interferon tipo I no
paSOFD9 e 12 do que no grupo paSOFD7. No experimento 3, embriões produzidos por FIV
foram cultivados até os dias 7, 9 e 12 de desenvolvimento e posteriormente foi coletado o
meio condicionado. A expressão de RNAm para IFNT2 foi avaliada nestes embriões FIV com
7, 9 e 12 dias. Nos embriões do dia 9, a expressão de RNAm para IFNT2 foi maior que nos
embriões do dia 7, e nenhuma diferença foi observada nos embriões do dia 12. O meio
condicionado por embriões FIV com 7, 9 e 12 dias foi utilizado no tratamento do cultivo de
células luteais e posteriormente foi avaliada a expressão de RNAm para ISG15. As células
luteais tratadas com ivfSOF (SOF condicionado por embriões FIV até os dias 7, 9 e 12, antes
da ultracentrifugação) e SN (SOF condicionado por embriões FIV até os dias 7, 9 e 12, após a
ultracentrifugação, sem vesículas extracelulares) apresentaram um aumento na expressão de
ISG15 quando comparadas com EVs (pellet enriquecido com exossomos obtidos após
ultracentrifugação do SOF condicionado por embriões FIV). Vesículas extracelulares foram
marcadas com PKH67 e observou-se sua presença dentro das células luteais. Desta forma,
percebe-se que o cultivo de células luteais respondeu ao tratamento com interferon tipo I
presente no meio condicionado por embriões PA e FIV já no dia 7 de desenvolvimento e esta
comunicação ocorre usando interferons na forma de proteína livre.
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