Diagnóstico laboratorial de Sarcocystis spp. em bovinos
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Date
2018-02-28Author
Ferreira, Maiara Sanitá Tafner 
Primeiro orientador
Vogel, Fernanda Silveira Flôres
Primeiro membro da banca
Sangioni, Luis Antonio
Segundo membro da banca
Cadore, Gustavo Cauduro
Terceiro membro da banca
Cezar, Alfredo Skrebsky
Quarto membro da banca
Toscan, Gustavo
Metadata
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Testes sorológicos são frequentemente utilizados para confirmar a infecção por Sarcocystis spp. e também são úteis para avaliação de um grande número de amostras. Testes moleculares proporcionam a detecção e caracterização de espécies de Sarcocystis. Portanto, os objetivos deste estudo foram: (1) investigar a infecção por Sarcocystis spp. em corações de bovinos, através de exame microscópico direto, reação em cadeia pela polimerase (PCR), polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (PCR-RFLP) e sequenciamento de DNA; (2) investigar a infecção por Sarcocystis spp. em bovinos pelo exame microscópico direto, confirmar a identidade dos sarcocistos por PCR e avaliar e correlacionar seus resultados com o diagnóstico sorológico dos bovinos pela imunofluorescência indireta; (3) comparar a imunofluorescência indireta (RIFI) e método de Dot-Blot para diagnóstico sorológico de infecção por Sarcocystis spp. em camundongos experimentalmente infectados e detectar possíveis reações sorológicas cruzadas com N. caninum e T. gondii. No Capítulo 1 desta tese apresenta-se um estudo no qual amostras de miocárdio de 314 bovinos foram coletadas de um frigorífico e analisados quanto a ocorrência de sarcocistos por microscopia óptica. Sarcocistos isolados de 134 destes corações foram submetidos à extração de DNA e PCR. O DNA amplificado foi digerido com enzimas de restrição BclI e RsaI para diferenciação entre S. cruzi, S. hirsuta e S. hominis. A espécie de Sarcocystis identificada foi confirmada por sequenciamento de DNA. Sarcocistos foram detectados em todas as amostras de miocárdio de bovinos avaliadas. A PCR-RFLP e sequenciamnto de DNA resultaram na identificação de S. cruzi. No estudo apresentado no Capítulo 2 foram coletadas amostras de miocárdio e sangue de 50 bovinos adultos de um frigorífico. Cada miocárdio foi submetido a exame microscópico a fresco para pesquisa de cistos compatíveis com Sarcocystis spp. Dez sarcocistos foram coletados de cada amostra e processados para extração de DNA seguida de PCR para diagnóstico molecular de Sarcocystis spp. A presença de anticorpos contra o parasito foi testada pela RIFI no soro sanguíneo. A frequência de detecção de sarcocistos pelo exame a fresco foi de 100% (50/50). Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. foram detectados em 96% (48/50) e 80% (40/50) das amostras de soro testadas na diluição de 1:25 e 1:200, respectivamente. DNA de Sarcocystis spp. foi amplificado pela PCR em 86% (43/50) dos cistos coletados. Os métodos empregados permitiram detectar a infecção por Sarcocystis spp. e a RIFI mostrou uma sensibilidade satisfatória em comparação com exame microscópico a fresco. No estudo apresentado no Capítulo 3, foram realizados exames sorológicos (RIFI e Dot-blot) de camundongos inoculados com Sarcocystis spp. ou N. caninum ou T. gondii. Dot-Blot demonstrou mesma sensibilidade e especificidade que a RIFI para diagnóstico sorológico de Sarcocystis em camundongos experimentalmente infectados e este teste não demonstrou reação sorológica cruzada com N. caninum e T. gondii.
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