Interação entre o brometo de piridostigmina e o desbalanço superóxido-peróxido de hidrogênio na cito-genotoxicidade de células neurais e imunes mononucleares
Fecha
2018-06-11Autor
Azzolin, Verônica Farina 
Primeiro orientador
Cruz, Ivana Beatrice Mânica da
Primeiro membro da banca
Bica, Claudia Giuliano
Segundo membro da banca
Bochi, Guilherme Vargas
Terceiro membro da banca
Moresco, Rafael Noal
Quarto membro da banca
Barcelos, Rômulo Pillon
Metadatos
Mostrar el registro completo del ítemResumen
O brometo de piridostigmina (PB) é um inibidor reversível da acetilcolinesterase (AChE), e a primeira linha
de tratamento dos sintomas associados à distúrbios da junção neuromuscular (JNM) e também foi utilizado de
forma profilática na Guerra do Golfo Pérsico (GWI), para prevenção de estresse pós traumático, exposição ao calor
e pesticidas. O papel do PB em relação a doença da GWI, que inclui sintomas como fadiga, disfunção cognitiva e
musculoesquelética ainda é controverso. Uma vez que se utilizado isoladamente parece não apresentar intensos
efeitos tóxicos, entretanto associado a outros farmacos e agentes quimicos torna-se genotóxico e indutor de
apoptose em animais. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar a interação entre o PB e o desbalanço
superóxido-peróxido de hidrogênio (S-HP) na cito-genotoxicidade de células neurais e imunes mononucleares.
Três delineamentos experimentais foram conduzidos. O primeiro estudo teve por objetivo avaliar o efeito do PB
sobre a cito e genotóxicidade em células neurais SHSY-5Y. Foi realizada uma investigação in vitro utilizando
células neurais humanas (SHSY-5Y). As células foram expostas ao PB em diferentes concentrações, com base
na concentração terapêutica plasmática do fármaco para o tratamento da Miastenia Gravis MG (40 ng/ mL). A
curva de concentração do fármaco mostrou uma inibição da atividade da AChE. No entanto, este efeito foi
transitório e não envolveu a regulação da expressão gênica da AChE. Em geral, o PB não desencadeou estresse
oxidativo, exceto na maior concentração (80 ng/mL), foi detectado dano proteico e dano ao DNA. Os efeitos
genotóxicos foram confirmados pelo aumento na expressão dos genes p53 e DNA metiltransferase 1 (DNMT1)
genes, que estão associados ao reparo do DNA celular. A concentração de 40 ng/mL, que é a dose terapêutica
mínima, apresentou um efeito cito-genotóxico menos intenso, promovendo uma maior proliferação celular e
atividade mitocondrial em comparação com o grupo não tratado. Esses efeitos foram corroborados pelo aumento
da expressão do gene da telomerase. Dois outros protocolos foram conduzido a fim de avaliar a influência genética
associada ao desequilíbrio oxidativo basal de S-HP desencadeado pelo polimorfismo de nucleotídeo único da
enzima superóxido dismutase 2 (Val16Ala-SOD2 SNP, rs4880). O genótipo VV apresenta maiores níveis de
superóxido basal (O2
-), enquanto o AA exibe maiores níveis de peróxido de hidrogênio (H2O2) basal quando
comparado com o do genótipo AV. Portanto, o objetivo foi avaliar se o polimorfismo Val16Ala-SOD2 poderia alterar
os efeitos cito-genotóxicos desencadeados por diferentes concentrações de PB em células mononucleares do
sangue periférico (CMSPs). As CMSPs foram obtidas de voluntários portadores de diferentes genótipos da SOD2.
Níveis proteicos e expressão gênica de enzimas antioxidantes, marcadores apoptóticos (Bax, Bcl-2, caspases 3 e
8) e DNMT1 foram avaliadas em culturas de 24 horas. Em geral, o PB aumentou a expressão gênica de enzimas
antioxidantes e desencadeou eventos apoptóticos nas células do genótipo AA. As CMSPs AA mostram-se mais
sensíveis à exposição ao PB, resultando em maior inibição da AChE, mortalidade celular, carbonilação de
proteínas e danos no DNA, conforme analisado pelo ensaio cometa. Contrariamente, o PB demonstrou efeitos citogenoprotetores
nas células do alelo-V. Esses resultados sugerem que fatores genéticos que aumentam a liberação
de H2O2 podem afetar a eficiência e a segurança do PB. Por fim, o terceiro estudo teve como objetivo avaliar in
vitro a interação entre o desbalanço farmacológico S-HP associado ao PB em células neurais SHSY-5Y. Um
protocolo farmacológico de desbalanço S-HP foi desenvolvido para obter células semelhantes ao genótipo AA (AA-like), apresentando níveis elevados de H2O2, e células semelhantes ao genótipo VV (VV-like), apresentando
maiores níveis de O2
-. Os resultados mostraram que a interação entre o desbalanço S-HP associado ao PB
diminuiu a viabilidade celular, aumentou os níveis de dano ao DNA em células AA-like. Análises da expressão
gênica e modulação proteica do BAX, BCl-2, caspase 3 e 8, sugerem que o efeito citotóxico sobre as células
neurais não envolve apoptose intrínseca ou extrínseca, sugerindo a ocorrência de outros processos na morte
celular. As células VV-like apresentaram maior atividade da AChE que as células balanceadas, e menor eficácia
na inibição dessa enzima pela exposição ao PB. Portanto, a interação entre o desequilíbrio S-HP em associação
como PB poderia ter algum papel no desenvolvimento da doença da GWI e na ocorrência de efeitos adversos em
alguns pacientes que utilizam para o tratamento da MG. Em síntese, apesar das limitações metodológicas
relacionadas aos estudos in vitro, o conjunto dos resultados confirmou que o PB isoladamente em células neurais
não causa extensa toxicidade, no entanto quando esse esta associado ao desbalanço oxidativo S-HP em células
neurais e periféricas pode causar toxicidade.
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