Construção e caracterização de um recombinante do Alphaherpesvirus caprino 1 com deleção no gene da Timidina Kinase
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2019-08-19Metadatos
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O Alphaherpesvirus caprino 1 (CpHV-1) é um patógeno de cabras distribuído mundialmente, associado com infecções sistêmicas e doença respiratória em caprinos jovens e infecção subclínica ou doença reprodutiva e abortos em animais adultos. As perdas associadas com a infecção pelo CpHV-1 poderiam ser prevenidas por vacinação, no entanto não existem vacinas comerciais disponíveis. Assim, o presente trabalho teve como objetivo construir e caracterizar um recombinante do CpHV-1 com deleção no gene da enzima timidina quinase (TK) para potencial uso em vacinas. Um recombinante contendo deleção total no gene tk foi construído por recombinação homóloga, introduzindo-se em seu lugar o gene da proteína verde fluorescente (eGFP) para seleção dos recombinantes. A caracterização in vitro demonstrou que o recombinante CpHV-1TK replicou em títulos similares e produziu placas de tamanho semelhante ao vírus parental em cultivos celulares. Com isso, demonstrou-se que a deleção do gene tk não afetou a capacidade replicativa in vitro do vírus. Após inoculação intranasal em 5 cabritos por vírus (107 TCID50), o vírus parental replicou de forma mais eficiente e por um período de tempo maior que o vírus recombinante. Além disso, o vírus parental produziu sinais clínicos sistêmicos e respiratórios moderados, enquanto os animais inoculados com o recombinante CpHV-1TK permaneceram saudáveis e soroconverteram em títulos mais baixos. Administração de dexametasona nos dias 35 a 39 pós-infecção (pi) não resultou em excreção viral em secreções nasais dos animais inoculados, indicando ausência de reativação viral. Entretanto, o DNA viral foi detectado no gânglio trigêmeo de 4 animais do grupo parental (4/5) e em 3 animais do grupo recombinante (3/5), eutanasiados no dia 14 pDx, indicando que ambos os vírus estabeleceram infecção latente. Esses resultados demonstram que o recombinante CpHV-1TK apresenta um fenótipo atenuado em caprinos jovens em comparação com o vírus parental e, portanto, pode ser uma cepa apropriada para uso em vacina.
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