Campylobacter fetus: revisão sistemática, desenvolvimento e caracterização antigênica da proteína SapA mutante com potencial imunobiólogico
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Date
2019-03-08Author
Balzan, Cláudia 
Primeiro orientador
Vargas, Agueda Palmira Castagna de
Primeiro membro da banca
Cargnelutti, Juliana Felipetto
Segundo membro da banca
Matter, Leticia Beatriz
Terceiro membro da banca
Gressler, Letícia Trevisan
Quarto membro da banca
Frandoloso, Rafael
Metadata
Show full item recordAbstract
A campilobacteriose genital bovina (CGB) é uma importante enfermidade reprodutiva
de caráter venéreo, causada pela bactéria Campylobacter fetus subsp. venerealis e
que acarreta perdas econômicas mundialmente significativas. Os principais fatores de
virulência deste agente são relacionados com a adesão, motilidade, proteínas de
superfície, produção de toxinas e sistemas de secreção e regulação. Esse patógeno
possui proteínas de superfície (SapA), as quais são consideradas importantes na
patogenia da CGB por apresentar variação antigênica e são responsáveis pela
persistência da infecção no trato genital bovino. A colheita de amostras e o diagnóstico
são bastante laborioso, sendo as amostras preconizadas para o diagnóstico são muco
vaginal, esmegma prepucial e sêmen, placenta e fetos abortados. A prevenção e o
controle desta enfermidade baseiam-se na vacinação, no uso de touros negativos
para a enfermidade e implementação de programas de inseminação artificial. Com o
intuito de simplificar as análises laboratoriais, este estudo objetivou a padronização
dos processos de produção de uma proteína quimérica recombinante de C. fetus e
avaliação de seu potencial como ferramenta para o diagnóstico e prevenção da CGB.
Utilizando as sequências dos nove genes homólogos de sapA de C. fetus
publicamente disponíveis, foram determinadas duas regiões para a contrução de um
gene sintético, denominado sapAN78, com a possibilidade da clonagem e expressão
do gene total e também das duas subunidades. O fragmento total e as subunidades
foram clonados no plasmídeo pAE, expressos em Escherichia coli BL21(DE3) pLySs
e purificados por cromatografia de afinidade ao níquel. A quimera recombinante de
aproximadamente 60 kDa e as subunidades foram obtidas em quantidades
significativas como corpos de inclusão, solubilizadas com ureia e detectadas por
Western blot com anticorpo monoclonal anti-polihistidina e por anticorpos presentes
no soro de bovinos positivos para CGB. A rSapAn78 foi utilizada para hiperimunização
de coelhos, apresentando soroconversão desde a primeira imunização e os anticorpos
produzidos ao final do protocolo de hiperimunização demonstraram-se ávidos ao
ensaio com tiocianato de amônio. Estes anticorpos também reconheceram a
rSapAn78 em testes de Dot blot, bem como a rSapAn78 e as proteínas nativas em
cepas de C. fetus por Western blot e ELISA. Desta forma, demonstrou-se a
imunogenicidade e antigenicidade da proteína quimérica contruída e seu potencial
para aplicações em pesquisas futuras para o diagnóstico e prevenção da CGB.
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