Avaliação dos efeitos de calcogenonucleosídeos derivados da zidovudina usando células sanguíneas como alvo toxicológico
Abstract
A zidovudina (AZT), um análogo do nucleosídeo timidina, é amplamente usado nos esquemas antirretrovirais e mais recentemente foi indicado, em associação com outros quimioterápicos, para o tratamento de alguns tipos de câncer. Pacientes em terapia com AZT vivenciam diversos efeitos colaterais ao longo do tratamento, a destacar as anormalidades hematopoiéticas. Em decorrência disso, a síntese de novas moléculas modificadas a partir da estrutura do AZT que exibam eficácia terapêutica e baixa toxicidade tem atraído o interesse da comunidade científica nos últimos anos. Com tais perspectivas, neste trabalho realizamos uma triagem para avaliar e comparar a toxicidade de três novos compostos derivados da molécula do AZT contendo porções de selênio, os calcogenonucleosídeos 5’-(4-Clorofenilseleno)zidovudina (SZ1), 5’-(Fenilseleno)zidovudina (SZ2) e 5’-(4-Metilfenilseleno)zidovudina (SZ3) em células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) quiescentes e estimuladas com fitohemaglutinina (PHA) e em eritrócitos isolados de sangue humano. As PBMCs foram expostas aos análogos e ao AZT nas concentrações de 10 a 200μM por 24 e 72h. Para eritrócitos e membranas isoladas (Ghosts), a exposição foi de 3 e 12h em concentrações que variaram de 10 a 500μM. Parâmetros inflamatórios, de viabilidade celular, morte celular e estresse oxidativo foram avaliados após os respectivos tratamentos. A fim de analisar a toxicidade dos compostos in vivo, camundongos adultos receberam uma única dose dos análogos e do AZT (100μmol/kg, s.c.) e 72h após a administração, biomarcadores hepáticos/renais foram analisados. A exposição ao SZ1 causou perda de viabilidade, aumento da produção de espécies reativas, atraso no ciclo celular, apoptose e aumento na expressão e produção de citocinas pró-inflamatórias em PBMCs quiescentes. A maioria desses efeitos também foi observado nas células expostas ao SZ2. O AZT e o SZ3 não causaram toxicidade significativa em PBMCs quiescentes. Achados similares foram encontrados em PBMCs estimuladas com fitohemaglutinina. Em eritrócitos, o SZ1 induziu hemólise e aumentou a fragilidade da membrana. A geração de espécies reativas e a peroxidação lipídica em ghosts também foram significativamente aumentadas nas células após exposição às concentrações mais altas de SZ1. A atividade das enzimas δ-ALA-D e Na+/ K+-ATPase foi inibida pelo SZ1 e SZ2. Além disso, ambos os derivados causaram eriptose, morte celular caracterizada pela translocação de fosfatidilserina para a superfície da membrana. O AZT e o SZ3 também não induziram efeitos tóxicos significativos em eritrócitos. In vivo, a exposição ao AZT e análogos não alterou o peso corporal dos animais e marcadores bioquímicos séricos de função renal e hepática. No entanto, o peso relativo do fígado, rins e baço foi alterado nos animais tratados com AZT, SZ1 e SZ2. Os resultados obtidos nesta pesquisa mostram que os derivados SZ1 e SZ2, contendo porções de clorofenilseleno e fenilseleno, respectivamente, foram tóxicos para PBMCs em diferentes fases de divisão, assim como para eritrócitos, provocando respostas celulares associadas com desbalanço redox, apoptose e inflamação. Por outro lado, o análogo SZ3 exibiu um perfil de efeitos similar ao AZT, emergindo assim como um promissor candidato para a ser testado em pesquisas com infecções virais e/ou câncer, onde o AZT é considerado o terapêutico modelo.
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