Desenvolvimento de método para a determinação de metais no sangue e sua correlação com a leucemia linfocítica aguda
Abstract
A leucemia linfocítica aguda (LLA) se caracteriza como uma doença hematológica que se origina durante o desenvolvimento de glóbulos brancos jovens, denominados linfócitos. Embora seja o tipo de câncer com o maior número de casos em crianças, adultos também podem ser diagnosticados com a doença. Em 2016, segundo o Instituto Nacional de Câncer (INCA), 10.070 novos casos (5.540 homens e 4.530 mulheres) foram diagnosticados no Brasil. O risco de desenvolvimento da doença para crianças apresenta um índice maior de incidência na idade de 2 a 5 anos. Para o combate da doença, recorre-se ao tratamento quimioterápico, onde diversos medicamentos são administrados com o intuito de destruir as células tumorais, geralmente por via venosa. Infelizmente, esses medicamentos não são seletivos e acabam causando danos a células sadias presentes no organismo. Desta maneira, o presente trabalho tem como objetivo determinar a concentração de alguns elementos presentes no sangue dos pacientes e correlacioná-los com possíveis danos colaterais ao longo do tratamento, uma vez que o decaimento ou aumento nas concentrações dos mesmos pode influenciar diretamente no desempenho de alguns órgãos, bem como, na homeostase do organismo como um todo. As amostras de sangue dos pacientes com LLA foram coletadas no Hospital Universitário de Santa Maria mediante consentimento do responsável, em diferentes estágios da doença. Devido a grande quantidade de amostras e volume reduzido, desenvolveu-se um método analítico para a decomposição de sangue utilizando um volume de apenas 250 μL em sistema aberto e frasco único descartável, utilizando uma mistura de HNO3 e H2O2 1:1 e irradiação micro-ondas por um período total de 20 minutos. O desenvolvimento deste método se mostrou crucial para a decomposição do grande volume de amostra pela sua boa eficiência e rapidez. Para que se tenham resultados confiáveis, possíveis contaminantes metálicos nos frascos de coleta e anticoagulantes foram avaliados. Os elementos determinados foram As, Cu, Mn, Rb, Sb, Sr, V e Zn. Embora outros metais, como os elementos terras raras, tenham sido monitorados, sua quantificação não foi possível por estarem abaixo do limite de quantificação ou pela contaminação proveniente dos frascos de coleta e manuseio, como é o caso de Ca, Mg, Na e Al. As determinações da concentração dos elementos foram realizadas por espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS). Além da determinação dos níveis de elementos presentes no sangue total de pacientes, testes de atividade enzimática para catalase também foram realizados com o intuito de correlacionar o efeito de uma possível redução nos níveis de metais com a eficiência das enzimas na redução da produção de espécies de oxigênio radicalar. Foi possível observar que pacientes com LLA possuem concentrações muito baixas de alguns elementos antes de iniciarem o tratamento da doença e que a concentração, ao chegarem à última etapa do tratamento, se aproxima muito da concentração do grupo controle. Os testes enzimáticos para catalase mostraram uma alta atividade para o início do tratamento e redução para etapas próximas ao final do tratamento, indicando uma possível redução na geração de espécies de oxigênio reativas geradas antes e durante o tratamento.
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