Genotipagem e aspectos filogenéticos e evolutivos de Pythium insidiosum
Resumo
Oomicetos são micro-organismos eucariontes pertencentes a um supergrupo denominado de Stramenopiles-
Alveolata-Rhizaria (SAR) que inclui integrantes com características sapróbias e patogênicas. Pythium
insidiosum, um patógeno de plantas e mamíferos, destaca-se entre os gêneros de maior importância na linhagem
peronosporalean. A pitiose é uma doença granulomatosa crônica de prognóstico desfavorável, amplamente
distribuída no mundo. Observa-se, nos últimos anos, um aumento de casos de pitiose, especialmente em animais
e humanos, sendo os locais de maior incidência o Brasil e a Tailândia, respectivamente. Destaca-se que muitas
lacunas do conhecimento sobre aspectos importantes dessa enfermidade devem ser preenchidas, especialmente
em relação à biologia e evolução do agente etiológico, à epidemiologia, ao diagnóstico e à terapêutica. Desta
forma, os objetivos do estudo são: (i) utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) baseada em
polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) de sequência de DNA ribossomal (rDNA) para identificar e
genotipar isolados sulamericanos de P. insidiosum e (ii) analisar as relações filogenéticas e aspectos evolutivos
dos peronosporaleans, especialmente de P. insidiosum usando uma abordagem multilocus com um gene
mitrocondrial e três genes nucleares. O objetivo (i) foi alcançado através da identificação de P. insidiosum pela
técnica de PCR-multiplex baseada em três SNPs. Adicionalmente, o método permitiu identificar a formação de
três clados de P. insidiosum (clado I: isolados americanos, incluindo pela primeira vez, um isolado do Uruguai,
clado II: isolados tailandeses, japonês e indiano e clado III: isolado tailândes). Os resultados que contemplam o
objetivo (ii) corresponde a análise multilocus de 55 oomicetos pelos métodos de Máxima Verossimilhança e
Análise Bayesiana. P. insidiosum formou um clado principal monofilético e politômico de isolados americanos;
no entanto, Pythium spp. foi parafilético com Phytopythium sp. e Phytophthora spp. Albugo candida foi
posicionado como um ramo inicial de peronosporaleans, que foi subdividido em três clados, um dos quais
evidenciaram a estreita relação de P. insidiosum, P. aphanidermatum e P. arrhenomanes. Os peronosporaleans
divergiram há 136 milhões de anos e P. insidiosum diversificou-se há aproximadamente 24 milhões de anos
atrás, com a divergência de isolados americanos e tailandeses, em aproximadamente 17 milhões de anos atrás e
diversificação americana posterior ocorrendo há 2,4 milhões de anos atrás. A reconstrução de caráter de estado
ancestral sugere que os ancestrais de peronosporaleans apresentavam propriedades fitopatogênicas, com os
ancestrais de Pythium + Phytopythium + Phythophthora apresentando propriedades necrotróficas. Conclui-se
nesta tese a aplicabilidade da multiplex-PCR para identificação e genotipagem dos isolados sul-americanos de P.
insidiosum, a qual evidenciou características genéticas semelhantes entre esses isolados. Adicionalmente, a
análise multilocus permitiu verificar relações filogenéticas e importantes aspectos evolutivos de oomicetos,
enfatizando P. insidiosum.
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