Influência da atmosfera gasosa e da fonte protéica sobre o desenvolvimento embrionário in vitro e taxa de prenhez em bovinos
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Data
2006-05-18Autor
Leivas, Fábio Gallas 
Primeiro orientador
Silva, Carlos Antonio Mondino
Primeiro membro da banca
Seneda, Marcelo Marcondes
Segundo membro da banca
Pimentel, Cláudio Alves
Terceiro membro da banca
Schossler, Deila Rosely Carneiro
Quarto membro da banca
Rubin, Mara Iolanda Batistella
Metadata
Mostrar registro completoResumo
Diferenças nos protocolos e sistemas de produção in vitro (PIV) de embriões bovinos
incluindo atmosfera gasosa, meios de cultivo e suplementação de proteína utilizados
nas diferentes etapas da PIV, influenciam diretamente os resultados finais de
desenvolvimento embrionário e prenhez. Dois experimentos foram conduzidos com o
objetivo de avaliar a influência da concentração de oxigênio na maturação in vitro
(MIV) e fecundação in vitro (FIV) de oócitos bovinos e da suplementação protéica no
cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. Complexos cumulus-oócitos imaturos
(COC) obtidos de fêmeas Bos taurus indicus por aspiração folicular transvaginal
guiada por ultra-sonografia (OPU) foram divididos homogeneamente quanto ao
número e a qualidade entre os tratamentos, sendo maturados por 24h, em TCM-199
modificado, acrescido FSH, LH, Estradiol, EGF, Insulina e 10% de SFB. Sêmen
congelado selecionado por gradientes de Percoll (2 x 106 células/mL) foi utilizado
para a fecundação em Fert-TALP com heparina e PHE, por 18 a 22h. Os prováveis
zigotos foram cultivados in vitro em SOFaaci por 6 a 9 dias em atmosfera de 5%CO2,
5%O2 e 90% N2. Todas as etapas foram conduzidas em estufa a 39ºC com umidade
saturada. Os percentuais de clivagem e de blastocistos foram analisados pelo
procedimento GLM. As taxas de eclosão dos blastocistos e de prenhez foram
comparadas por Qui-quadrado com significância de 5%. No experimento I (11
repetições), a MIV e FIV dos COC (n=1092) foram realizadas sob atmosfera de 5%
de CO2 em ar (20%O2) ou em 5%CO2, 5%O2 e 90% N2 (5%O2). O experimento II foi
dividido em 2 etapas (IIa e IIb). No experimento IIa (n=1745 COC) após a MIV e FIV
foi realizado o CIV em meio SOFaaci acrescido de 4mg/mL albumina sérica bovina (BSA) ou 4mg/mL de BSA + 2% de soro fetal bovino (BSA+SFB). No experimento
IIb (n=704 COC), após a MIV e FIV, o CIV foi conduzido nos dois meios do
experimento IIa (BSA e BSA+SFB) e um terceiro grupo onde o SOFaaci+BSA foi
suplementado com 2% de SFB no quarto dia de cultivo (BSA+SFBD4). As
avaliações morfológicas foram efetuadas no D2 (clivagem), D7 (blastocistos e grau
de qualidade), D9 (blastocistos eclodidos) e taxa de prenhez aos 45 (experimento I)
e 60 dias (experimento II), considerando-se o dia da fecundação como D0. No
experimento I, não houve diferença (P>0,05) nas taxas de clivagem (69 e 70%),
blastocistos em D7 (37 e 38%) e blastocistos qualidade I (79 e 74%) entre
atmosfera de 5%O2 ou 20% de O2, respectivamente. A taxa de eclosão em D9 sob
o total de oócitos MIV foi superior (P<0,05) no grupo 5%O2 (21%) comparado ao
grupo MIV e FIV sob 20%O2 (11%). A taxa de prenhez aos 45 dias dos embriões
transferidos (n=278) foi semelhante (P=0,15) entre os tratamentos (25,8 e 33,6%
para 5%O2 e 20%O2 respectivamente). No experimento IIa, a taxa de blastocistos
(51,5%) e de blastocistos qualidade I (41%) em D7, foi superior (P<0,05) para o
grupo BSA+SFB em relação ao BSA (42 e 30%), respectivamente. No experimento
IIb, a taxa de blastocistos foi superior (P<0,05) no grupo BSA+SFB e semelhante
(P>0,05) entre o grupo BSA e BSA+SFBD4. A taxa de blastocistos qualidade I foi
superior para os grupos BSA+SFB (34%) e BSA+SFBD4 (32,2%) em comparação
ao grupo BSA (19,9%). A taxa de prenhez em relação aos embriões transferidos
(n=820) foi semelhante entre os tratamentos nos experimentos IIa e IIb. A taxa de
prenhez correspondente aos oócitos colocados para MIV foi superior (P<0,05) para o
grupo BSA+SFB (16%) comparado ao grupo BSA (12%) no experimento IIa. Não há
comprometimento da PIV de embriões bovinos bem como da taxa de prenhez
quando a MIV, FIV e CIV são conduzidas com 5%O2, 5%CO2 e 90%N2. A produção
in vitro de embriões é incrementada pela adição de 2% de SFB ao meio de CIV, sem
prejudicar a qualidade morfológica dos mesmos e a taxa de prenhez. A porcentagem
de prenhez produzida em relação aos COC colocados para MIV é aumentada pela
adição de 2% de SFB ao meio de cultivo in vitro SOFaaci+BSA.