Efeitos do parapoxvirus ovis inativado sobre eventos da resposta imune inata em camundongos
Abstract
As propriedades imunoestimulatórias do Parapoxvirus ovis inativado (iPPVO) têm sido
verificadas em diferentes espécies animais e condições experimentais. No presente trabalho
foram investigados os efeitos da administração do iPPVO sobre eventos da resposta inata de
camundongos. Ativação de neutrófilos, atividade fagocítica de macrófagos, atividade
bactericida do soro, indução e atividade antiviral do interferon tipo I (INF-I) e expressão de
várias classes de citocinas foram investigados em diferentes intervalos após inoculação de
Mus musculus pela via intraperitonial com iPPVO (dose 107 TCID50). O soro de animais
tratados com iPPVO apresentou atividade de INF-I frente ao vírus da encefalomiocardite
murina (EMCV) entre 6 e 12 horas pós inoculação (hpi), como demonstrado pela redução
significativa de formação de placas virais. Uma significativa ativação dos neutrófilos
circulantes foi observada pela técnica de redução do NBT em animais tratados com o iPPVO
às 6 hpi. Macrófagos peritoneais de camundongos tratados com iPPVO demonstraram um
aumento significativo (p<0,01) na atividade fagocítica frente a Candida albicans tanto in
vivo (entre 12 e 96 hpi) quanto in vitro (24 e 72hpi). Camundongos tratados com iPPVO
apresentaram aumento na atividade bactericida do soro frente à Escherichia coli (p<0,05) em
dois períodos avaliados (24 e 72 hpi). Um segundo estudo avaliou a expressão de citocinas em
resposta à inoculação do iPPVO. Para isso, amostras de baço e soro foram coletados de
camundongos tratados com iPPVO em diferentes intervalos após a inoculação e submetidas a
quantificação de RNA mensageiro (RNAm) por PCR em tempo real (qRT-PCR) e
detecção/quantificação de citocinas no soro por ELISA. A quantificação de RNAm permitiu
detectar um aumento significativo e transitório da expressão de várias citocinas, com
magnitude e cinética variáveis. A expressão de RNAm das citocinas pró-inflamatórias (IL-1β,
TNF-α e IL-8) atingiu o pico às 24 hpi (aumento de 5,4 vezes), 48 hpi (3 e 10 vezes,
respectivamente). Um aumento de 15 vezes na expressão gênica do INF-γ, e de 6 vezes para
a IL-12 foi observado às 48 e 24 hpi, respectivamente. Um incremento na expressão das
citocinas auto-regulatórias (Th2), principalmente IL-10 e IL-4, foi detectado em períodos
mais tardios (72 e 96 hpi) com picos de 4,7 e 4,9 vezes, respectivamente. A determinação da
concentração das citocinas séricas por ELISA revelou um aumento nos níveis de IL-1β, TNF-
α, IL-12, INF-γ e IL-10, com uma cinética similar à observada pela técnica de qPCR,
especialmente para IL-1β e INF-γ. Em resumo, esses resultados demonstram que o tratamento
com iPPVO estimula de forma significativa e transitória uma série de eventos celulares e
humorais ligados à resposta imune inata. Esses efeitos, se considerados em conjunto,
provavelmente contribuem para o aumento da magnitude da resposta imunológica a certos
patógenos observada em animais tratados com o iPPVO.