Validação de método por cromatografia líquida em fase reversa para avaliação de potência de molgramostima. Correlação com o bioensaio
Resumo
O fator estimulador da colônia de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) é uma citocina que
regula a proliferação e diferenciação de células progenitoras hematopoiéticas e ativa granulócitos e
macrófagos maduros. É clinicamente indicado após quimioterapia para o câncer e após transplante de
medula óssea. No presente trabalho foi validado método por cromatografia líquida em fase reversa
(CL-FR) para a avaliação da molgramostima, forma recombinante não-glicosilada do GM-CSF, em
formulação biofarmacêutica. Utilizou-se coluna Júpiter C4 (250 mm x 4,6 mm d.i.), mantida a 45 °C.
A fase móvel A foi composta de ácido trifluoracético 0,1% e a fase móvel B de ácido trifluoracético
0,1% em acetonitrila, eluídas no gradiente: 0,01 34 min, 37 50% de B; 34 35 min, 50 37% de
B, mantendo-se nesta proporção até 40 min. Utilizou-se vazão de 1 mL/min, usando detector de
arranjo de diodos (DAD) a 214 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 29,2 min,
sendo linear na faixa de concentração de 2 300 μg/mL (r2 = 0,9992). O procedimento foi validado,
avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de
detecção e quantificação. A especificidade foi comprovada através de estudos de degradação,
demonstrando também que não houve interferência dos excipientes. Além disso, realizou-se o teste de
citotoxicidade in vitro dos produtos degradados que apresentaram diferença significativa (p<0,05). O
método foi aplicado para avaliação de potência de molgramostima e de proteínas relacionadas, e os
resultados foram correlacionados com o bioensaio, observando-se diferenças médias de potência
1,02% superiores por CL-FR. Contribuiu-se assim para o estabelecimento de alternativas que
aprimoram o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica.