Regulação do sistema peptídeos natriuréticos nas células da granulosa e do cumulus na foliculogênese em bovinos
Abstract
Esta tese tem como objetivo contribuir para o conhecimento da regulação e função do sistema
dos peptídeos natriuréticos (NP) durante a dominância folicular, ovulação, retomada da
meiose oocitária e expansão das células do cumulus em bovinos. No primeiro estudo,
caracterizou-se o sistema NP no CCO de bovino e foi demonstrado que o NPPA e o NPPC
aumentam os níveis de cGMP no cumulus e no oócito após 3 horas de cultivo, impedindo o
aumento de cAMP no oócito na presença de forskolin. No segundo estudo, utilizando modelos
experimentais in vivo, os três NPs não foram detectados nas células da granulosa durante a
divergência folicular em bovinos. Contudo, demonstrou-se que o NPR-3 apresenta maior
expressão no momento esperado da divergência folicular, sendo que após este momento os
três receptores NPs apresentavam alta expressão nas células da granulosa do folículo
dominante. A administração de FSH manteve a expressão dos três receptores NPs após a
divergência folicular no maior e segundo maior folículo. Porém, somente a expressão do
NPR-1 diminui após a inibição dos receptores de estradiol pela injeção intrafolicular de
fulvestrant. Nas células da granulosa de folículos pré ovulatórios, somente o NPPB não foi
detectado. De modo que, após a administração de um análogo de GnRH, a expressão de
NPPC aumentou em 3 e 6 horas e a de NPR-3 gradualmente diminuiu após 3 horas. NPPA e
NPR-2 não foram regulados pelo GnRH, e o NPR-1 teve a expressão aumentada somente 24
horas após o GnRH. No terceiro estudo, a abundância de mRNA para NPR-1, NPR-2 e NPR-
3 nas células da granulosa não foi alterada por LH e/ou por AG1478 (inibidor do EGFr) após
6 horas de cultivo in vitro. Também em cultivo in vitro de células da granulosa, o LH
estimulou a expressão de NPPC, sendo que o AG1478 impediu este aumento. Como forma de
comprovar esses resultados in vitro, utilizamos um modelo in vivo e observamos que a
expressão do NPPC aumentou e a do NPR-3 diminuiu após 6 horas do desafio com GnRH,
nas células da granulosa. De maneira que, a injeção intrafolicular de AG1478 preveniu o
efeito do GnRH sobre a expressão do NPPC e NPR-3. Além disso, foi demonstrado que o
ANP em associação com o LH estimulou a expressão de COX2 em comparação com LH
isoladamente ou ausência desta gonadotrofina. Também foi demonstrado que o bloqueio do
EGFr in vivo não foi suficiente para bloquear a ovulação em bovinos. No quarto estudo, foi
observado que a expressão do NPR-3 diminui nas células do cumulus pelo tratamento dos
CCOs com FSH ou FSH+LH via EGFr em bovinos. Forskolin (estimulador adenilato ciclase)
também induziu a diminuição da expressão do NPR-3. A expressão do NPR-1 foi muito baixa
no cumulus de bovino e o NPR-2 não apresentou regulação nos tratamentos propostos. Além
disso, foi observado que a ativação do NPR-3 por um agonista específico (cANP4-23) não
interferiu na maturação nuclear oocitária em bovinos, porém, inibiu a completa expansão das
células do cumulus estimulada por FSH+LH. De maneira que, a associação do cANP4-23 com
CNP potencializou a inibição da expansão das células do cumulus.
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