Produção e caracterização de uma quimera recombinante de proteína de superfície de Campylobacter fetus
Resumo
A campilobacteriose genital bovina (CGB) é uma importante enfermidade de caráter venéreo, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis e que acarreta perdas econômicas por causar problemas reprodutivos nos rebanhos bovinos. Esse patógeno possui proteínas de superfície (SapA), as quais são consideradas importantes na patogenia desta enfermidade por apresentar variação antigênica e serem responsáveis pela persistência da infecção no trato genital bovino. O diagnóstico laboratorial da CGB envolve procedimentos fastidiosos de colheita de material e de seu processamento. Com o intuito de facilitar as análises laboratoriais, este estudo objetivou a padronização dos processos de produção e caracterização de uma proteína quimérica recombinante. Desenhou-se um gene sintético quimérico, denominado sapAN78 a partir de sequências da Sap de C. fetus disponíveis publicamente. O fragmento foi clonado no plasmídeo pAE e expresso em Escherichia coli BL21(DE3) pLySs. A quimera recombinante de aproximadamente 60 kDa foi obtida como corpos de inclusão, solubilizada em tampão contendo ureia e purificada por cromatografia de afinidade ao níquel (Ni+2). Após a proteína foi submetida à diálise lenta e realizada a sua caracterização. Esta foi reconhecida por Western blot com anticorpo monoclonal anti-polihistidina, por anticorpos presentes no soro de bovinos vacinados para CGB e por Dot blot a rSapAn78 foi reconhecida por soros de bovinos e soro hiperimune produzido em coelho. Assim, expressão e caracterização de uma proteína de superfície na sua forma recombinante para o diagnóstico desta enfermidade torna a análise das amostras mais prática e acessível. Considerando tais resultados, essa nova proteína possui potencial aplicação em métodos menos laboriosos de diagnóstico para a detecção de campilobacteriose em bovinos.
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