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dc.creatorBalzan, Cláudia
dc.date.accessioned2019-07-16T17:34:03Z
dc.date.available2019-07-16T17:34:03Z
dc.date.issued2015-02-23
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufsm.br/handle/1/17465
dc.description.abstractBovine genital campylobacteriosis (BGC) is an important venereal disease, caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis and related economic losses since it cause reproductive problems in cattle herds. SapA is a surface protein important for the pathogenesis of this bacterium by presenting antigenic variation and be responsible for the persistence of the infection in bovine genital tract. In order to facilitate the laboratory diagnosis of BGC, which involves labor - intensive procedures for collecting and processing the samples, this study aimed to standardize the production of a recombinant chimeric protein and also evaluate their potential as a tool for enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for sorological diagnosis of BCG in herds. The conserved region of nine homologous sequences of C. fetus sapA gene publicly available was used to design a chimeric synthetic gene, called sapAN78, with 1587 base pairs. The fragment was cloned into pAE plasmid and expressed in Escherichia coli BL21(DE3) pLysS. The recombinant chimera (≈60 kDa) was obtained as inclusion bodies, solubilized in a buffer containing urea and purified by nickel affinity chromatography (Ni+2). The protein was recognized by Western blotting with monoclonal polyhistidine antibodies and with sera from CGB vaccinated cattle and by Dot blotting using bovine sera and hyperimmune serum produced in rabbits. Indirect ELISA based on the recombinant protein purified has been standardized and tested 219 sera samples from cattle. The sensitivity and specificity of this assay were 90.91% and 89.78%, respectively. Therefore, rSapAn78 has potential as antigen for indirect ELISA for serological diagnosis of C. fetus in cattle.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESpor
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Santa Mariapor
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectCampilobacteriose genital bovinapor
dc.subjectProteína recombinantepor
dc.subjectPurificaçãopor
dc.subjectBovine genital campylobacteriosiseng
dc.subjectRecombinant proteineng
dc.subjectPurificationeng
dc.titleProdução e caracterização de uma quimera recombinante de proteína de superfície de Campylobacter fetuspor
dc.title.alternativeProduction and characterization of a recombinant chimera of surface protein of Campylobacter fetuseng
dc.typeDissertaçãopor
dc.description.resumoA campilobacteriose genital bovina (CGB) é uma importante enfermidade de caráter venéreo, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis e que acarreta perdas econômicas por causar problemas reprodutivos nos rebanhos bovinos. Esse patógeno possui proteínas de superfície (SapA), as quais são consideradas importantes na patogenia desta enfermidade por apresentar variação antigênica e serem responsáveis pela persistência da infecção no trato genital bovino. O diagnóstico laboratorial da CGB envolve procedimentos fastidiosos de colheita de material e de seu processamento. Com o intuito de facilitar as análises laboratoriais, este estudo objetivou a padronização dos processos de produção e caracterização de uma proteína quimérica recombinante. Desenhou-se um gene sintético quimérico, denominado sapAN78 a partir de sequências da Sap de C. fetus disponíveis publicamente. O fragmento foi clonado no plasmídeo pAE e expresso em Escherichia coli BL21(DE3) pLySs. A quimera recombinante de aproximadamente 60 kDa foi obtida como corpos de inclusão, solubilizada em tampão contendo ureia e purificada por cromatografia de afinidade ao níquel (Ni+2). Após a proteína foi submetida à diálise lenta e realizada a sua caracterização. Esta foi reconhecida por Western blot com anticorpo monoclonal anti-polihistidina, por anticorpos presentes no soro de bovinos vacinados para CGB e por Dot blot a rSapAn78 foi reconhecida por soros de bovinos e soro hiperimune produzido em coelho. Assim, expressão e caracterização de uma proteína de superfície na sua forma recombinante para o diagnóstico desta enfermidade torna a análise das amostras mais prática e acessível. Considerando tais resultados, essa nova proteína possui potencial aplicação em métodos menos laboriosos de diagnóstico para a detecção de campilobacteriose em bovinos.por
dc.contributor.advisor1Vargas, Agueda Palmira Castagna de
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/1383126157031968por
dc.contributor.referee1Conceição, Fabricio Rochedo
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9342312279387017por
dc.contributor.referee2Vogel, Fernanda Silveira Flôres
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/9676833435314493por
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/0995533456110201por
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.departmentMedicina Veterináriapor
dc.publisher.initialsUFSMpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Medicina Veterináriapor
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIApor
dc.publisher.unidadeCentro de Ciências Ruraispor


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