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dc.creatorCarmo, Guilherme Machado do
dc.date.accessioned2021-03-17T09:57:11Z
dc.date.available2021-03-17T09:57:11Z
dc.date.issued2018-02-09
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufsm.br/handle/1/20449
dc.description.abstractChagas disease is a zoonosis caused by Trypanosoma cruzi. It occurs primarily in Latin America, where it causes serious health problems for about 7 million people in endemic regions. Considering that Chagas disease currently few effective treatments, and those that exist carry several side effects, new alternatives for treatment should be evaluated. Therefore, the objective of this study was to evaluate the efficacy of cordycepin (an adenosine analogue) and pentostatin (an inhibitor of the enzyme adenosine deaminase) in mice experimentally-infected with T. cruzi, and also to verify if the purinergic system is affected and has a role in the pathogenesis of Chagas disease. We did this because nucleosides and nucleotides in the purinergic cascade are involved in the pathophysiology of various parasitic infections. The study design was divided into four experimental protocols. In the experimental protocol I, the animals were divided into two groups (n = 6): control group (not infected with T. cruzi), and infected group (infected with T. cruzi). We then investigated the effect of purinergic enzymes on platelets, lymphocytes, and hearts in experimentally-infected mice infected with T. cruzi (strain Y). We observed increased activity of E-NTPDase (ATP and ADP substrates) and E-ADA in lymphocytes of T. cruzi-infected mice (P <.01). We observed inflammatory infiltrates in the heart, as well as multiple pseudocysts containing amastigotes. However, NTPDase activity did not change in the T. cruzi-infected group, but there was a reduction in the activity of 5'-nucleotidase (P <.001) and an increase in ADA activity in infected mice (P <.05). Activity of E-NTPDase (ATP and ADP substrates), E-5'nucleotidase and E-ADA in platelets increased significantly (P <.05) in mice infected with T. cruzi. In the experimental protocol II, the animals were divided into 10 groups with six animals (five control groups and five infected groups), in which the animals of the infected groups were inoculated with 104 triposmastigotes of strain Y. In this experimental protocol, we evaluated the efficacy of treatment with cordycepin and pentostatin (isolated or in combination), as well as the effect of treatment on purinergic enzymes in vivo. From this design we obtained the curative ineffectiveness of the experimental protocol, despite having reduced parasitemia. We also found that serum NTPDase activity (ATP; P <.001, ADP; P <.05) and ADA (P <.001) were higher in untreated T. cruzi-infected mice. However, mice treated with a combination of 3'-deoxyadenosine and deoxycoformycin were able to modulate NTPDase activity (ATP and ADP substrate) and ADA, preventing the increase in activity in infected animals (i.e., to activity levels similar to those of healthy animals). The activity of 5'-nucleotidase significantly decreased (P <.01) in untreated infected animals, but treatment prevented the reduction of 5'-nucleotidase activity. In experimental protocol III, the animals were divided into five groups of six animals each (one control group and four infected groups), in which the animals of the infected groups were inoculated with triphosmastigotes of the benznidazole-resistant strain (Colombian strain). In protocol III, we evaluated the efficacy of the treatment with cordycepin and pentostatin (alone or in combination). In this protocol, we also performed in vitro tests to evaluate the efficacy of the compounds against T. cruzi. In this experiment, the results were similar to those of protocol II, i.e., ineffectiveness of treatments in mice infected with T. cruzi. In the in vitro experiment, we observed a significant reduction (P <.001) of epimastigotes and trypomastigotes in groups treated with cordycepin and pentostatin (alone or combined) at all doses tested. For epimastigotes and trypomastigotes the lethal doses of the association of cordycepin with pentostatin capable of killing 50% (DL50) of parasites were 0.068 mg/mL and 0.027 mg/mL, respectively. In experimental protocol IV, the animals were divided into two groups (n = 6): control group (not infected with T. cruzi) and infected group (infected with T. cruzi). The animals in the infected group were inoculated with 104 triphosmastigotes from the Colombian strain, and we evaluated the effects of the infection on serum purine concentrations. In this protocol, we observed a significant increase (P <.05) in serum levels of ATP, (ADP), adenosine (ADO), inosine (INO) and uric acid (URIC) in infected animals. By contrast, the levels of adenosine monophosphate (AMP) and xanthine (XAN) reduced significantly (P <.05). Therefore, we can conclude in general that T. cruzi infection alters purinergic system enzymes, as well as purine levels, demonstrating that they are directly related to the pathophysiology of Chagas disease. The therapeutic protocol, at the dose used, should not be recommended for the treatment of Chagas disease, since it had no curative efficacy.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESpor
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Santa Mariapor
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectCordicepinapor
dc.subjectPentostatinapor
dc.subjectSinalização purinérgicapor
dc.subjectT. cruzipor
dc.subjectCordycepineng
dc.subjectPentostatineng
dc.subjectPurinergic signalingeng
dc.titleCamundongos infectados experimentalmente com Trypanosoma cruzi: efeito da doença de chagas sobre as enzimas purinérgicas e testes de um novo protocolo tripanocidapor
dc.title.alternativeMice experimentally-infected with Trypanosoma cruzi: effect of chagas disease on purinergic enzymes, and evaluation of a new trypanocidal protocoleng
dc.typeTesepor
dc.description.resumoA Doença de Chagas é uma zoonose causada pelo Trypanosoma cruzi, presente principalmente na América Latina causando graves problemas de saúde em cerca de 7 milhões de pessoas em regiões endêmicas. Considerando que a Doença de Chagas prossegue ineficaz na cura e que o tratamento possui diversos efeitos colaterais, novas alternativas para o tratamento devem ser avaliadas. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do tratamento com cordicepina (análogo de adenosina) e pentostatina (inibidor da enzima adenosina desaminase) em camundongos experimentalmente infectados com T. cruzi e também verificar se o sistema purinergico é afetado e tem participação na patogenia da Doença de Chagas, visto que, nucleosídeos e nucleotídeos da cascata purinérgica estão envolvidos na fisiopatologia de várias infecções parasitárias. O delineamento do estudo foi dividido em quatro protocolos experimentais. No protocolo experimental I, os animais foram divididos em dois grupos (n=6): grupo controle (não infectadas com T. cruzi) e grupo infectado (infectadas com T. cruzi) e assim foi investigado o efeito das enzimas purinérgicas em plaquetas, linfócitos e coração de camundongos infectados experimentalmente por Trypanosoma cruzi (cepa Y). Como resultado observou-se um aumento na atividade da E-NTPDase (substratos ATP e ADP) e da atividade da E-ADA em linfócitos em camunbdongos infectados com T. cruzi (P<0,01). No coração foi observado a presença de infiltrados inflamatórios, assim como múltiplos pseudocistos contendo amastigotas, no entanto a atividade da NTPDase não alterou-se no grupo infectado com T. cruzi, porém foi observado uma redução na atividade da 5'-nucleotidase (P<0,001) e um aumento na atividade de ADA nos infectados (P<0,05). A atividade de E-NTPDase (substratos ATP e ADP), E-5'nucleotidase e E-ADA em plaquetas aumentaram significativamente (P<0,05) em camundongos infectados por T. cruzi. No protocolo experimental II os animais foram divididos em 10 grupos com seis animais (5 grupos controles e 5 grupos infectados), no qual, os animais dos grupos infectados foram inoculados com 104 triposmastigotas da cepa Y. Neste protocolo experimental II foi avaliada a eficácia do tratamento com cordicepina e pentostatina (isolados ou em combinações), bem como o efeito do tratamento sobre as enzimas purinérgicas in vivo. A partir desse delineamento constatamos a ineficácia curativa do protocolo experimental, apesar de ter reduzido a parasitemia. Tambem verificamos que as atividades séricas de NTPDase (ATP; P<0,001, ADP; P<0,05) e ADA (P<0,001) foram superiores em camundongos não tratados, mas infectados por T. cruzi. No entanto, os camundongos tratados com combinação de 3'-desoxiadenosina e desoxicoformicina foram capazes de modular a atividade de NTPDase (ATP e substrato ADP) e a ADA, impedindo o aumento nos animais infectados (atividade semelhante a animais saudáveis). A atividade da 5'-nucleotidase diminuiu significativamente (P<0,01) nos animais não tratados e infectados, porém o tratamento associado impediu a redução da atividade da 5'-nucleotidase. No protocolo experimental III, os animais foram divididos 5 grupos com seis animais (1grupo controle e 4 grupos infectados), no qual, os animais dos grupos infectados foram inoculados com 104 triposmastigotas da cepa resistente ao benzonidazol (cepa Colombiana). Neste protocolo experimental III foi avaliada a eficácia do tratamento com cordicepina e pentostatina (isolados ou em combinações). Neste protocolo também foi realizado testes in vitro para avaliar a eficácia dos compostos frente ao T. cruzi. Nesse experimento os resultados foram similares ao experimento II, isto é, ineficácia curativa em camundongos infectados com T. cruzi. Já no experimento in vitro foi observado uma redução significativa (P <0,001) de epimastigotas e tripomastigotas em grupos tratados com cordicepina e pentostatina (isolada ou combinada), em todas as doses testadas. Para epimastigotas e tripomastigotas a dose letal da associação de cordicepina com pentostatina capaz de matar 50% (DL50) dos parasitas foi de 0,068 mg/mL e 0,027 mg/mL, respectivamente. No protocolo experimental IV, os animais foram divididos em dois grupos (n=6): grupo controle (não infectadas com T. cruzi) e grupo infectado (infectadas com T. cruzi). Os animais do grupo infectado foram inoculados com 104 triposmastigotas da cepa colombiana e foi avaliado o efeito da doença sobre as concentrações séricas de purinas. Neste protocolo observou-se aumento significativo (P <0,05) nos níveis séricos de adenosina trifosfato (ATP), adenosina difosfato (ADP), adenosina (ADO), inosina (INO) e ácido úrico (URIC) em animais infectados. Já os níveis de adenosina monofosfato (AMP) e xantina (XAN) reduziram significativamente (P <0,05). Portando, podemos concluir de modo geral que a infecção por T. cruzi altera as enzimas do sitema purinérgico, assim como os níveis de purinas, demonstrando que estão diretamente ligadas com a fisiopatologia da Doença de Chagas. Já o protocolo terapêutico, na dose utilizada, não deve ser recomendado para o tratamento da Doença de Chagas, pois não teve eficácia curativa.por
dc.contributor.advisor1Silva, Aleksandro Schafer da
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/3485147800868305por
dc.contributor.referee1Leal, Marta Lizandra do Rêgo
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/6859797230596402por
dc.contributor.referee2Santos, Roberto Christ Vianna
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/9176719594431835por
dc.contributor.referee3Ourique, Aline Ferreira
dc.contributor.referee3Latteshttp://lattes.cnpq.br/7478810804464054por
dc.contributor.referee4Moreira, Cleci Menezes
dc.contributor.referee4Latteshttp://lattes.cnpq.br/5805841991374556por
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/6344986584228234por
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.departmentBioquímicapor
dc.publisher.initialsUFSMpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Ciências Biológicas: Bioquímica Toxicológicapor
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICApor
dc.publisher.unidadeCentro de Ciências Naturais e Exataspor


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