Criopreservação e desenvolvimento de oócitos bovinos tratados com citocalasina B
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Data
2001-07-20Primeiro membro da banca
Bernardi, Mari Lourdes
Segundo membro da banca
Pegoraro, Ligia Margareth Cantarelli
Terceiro membro da banca
Azambuja, Ricardo Marques de
Quarto membro da banca
De La Côrte, Flávio Desessards
Metadata
Mostrar registro completoResumo
O progresso obtido em biotécnicas da reprodução tem levado a novos desafios em muitas áreas. Entre estes se destaca o desenvolvimento de uma técnica eficiente para a criopreservação de oócitos bovinos. Com este objetivo, dois estudos foram conduzidos para avaliar a influência da citocalasina B (CB) na vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro. No primeiro, avaliou-se em 3 experimentos (Capítulo 1- Experimentos I, II e III), o desenvolvimento embrionário de oócitos bovinos maturados in vitro, expostos a diferentes concentrações de CB, associada ou não à centrifugação. Nos experimentos I e II, foram conduzidos quatro tratamentos: Centrifugação a 2100g por 5 minutos (T1); Exposição a 7,5μg/mL CB, por 15 minutos (T2); Centrifugação após exposição à CB (T3) e Oócitos controle (T4). No experimento III, os oócitos foram submetidos a três concentrações de CB: 7,5μg/mL (T1); 15μg/mL (T2) e 45μg/mL (T3). A clivagem (Experimento I), bem como a formação e eclosão de blastocistos (Experimento II) não foram influenciadas pelos tratamentos efetuados. A exposição a doses mais elevadas de CB (Experimento III) não reduziu a taxa de clivagem e de blastocistos. Em seqüência, avaliou-se a influência de diferentes concentrações de CB na vitrificação de oócitos e embriões bovinos produzidos in vitro. No capítulo 2 (Experimento I), oócitos foram maturados por 22 horas, sendo imediatamente vitrificados (tratamento Vitri) ou expostos por 15 a 20 minutos, à solução com 7,5μg/mL (tratamento CB7,5Vitri) ou 45μg/mL (tratamento CB45Vitri) de citocalasina B, antes da vitrificação. Após 30 segundos de exposição a solução de equilíbrio (SV1) e 20 segundos a solução de vitrificação (SV2), os oócitos foram vitrificados em palhetas estiradas (OPS). O reaquecimento foi realizado em duas etapas de 5 minutos cada, em soluções decrescentes de trealose. Não foram observadas diferenças (P>0,05) nos percentuais de clivagem e de embriões entre os tratamentos Vitri, Cito7,5Vitri e Cito45Vitri, que foram inferiores (P<0,05) ao controle. No Experimento II, 269 blastocistos expandidos foram distribuídos em 3 tratamentos. No tratamento Vitri os embriões foram expostos por 1 minuto a SV1 e 20 segundos a SV2, que teve a trealose substituida por TCM-Hepes. No tratamento CB45Vitri, a vitrificação ocorreu após exposição por 10 minutos a solução com 45μg/mL de CB. Não foram observadas diferenças (P>0,05) no percentual de re-expansão e eclosão entre os grupos Vitri e CB45Vitri, os quais foram inferiores (P<0,05) ao grupo controle. Os resultados indicam que a exposição a citocalasina B não reduz a viabilidade de oócitos bovinos durante o cultivo e não produz efeito benéfico no processo de vitrificação.
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