Fator de crescimento fibroblástico 18 (FGF18) modula a expressão de genes da via de sinalização hippo em células da granulosa bovina
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Data
2023-03-28Primeiro membro da banca
Barreto, Kátia Padilha
Segundo membro da banca
Goetten, André Lúcio Fontana
Metadata
Mostrar registro completoResumo
Proliferação, diferenciação funcional e transformação morfológica de células da granulosa (CGs) são eventos significativos para o desenvolvimento folicular ovariano, maturação, atresia e ovulação. Há evidências que mostram que a apoptose das GCs é o principal mecanismo da atresia folicular ovariana. Em estudos anteriores, foi demonstrado que o efeito inibitório do FGF18 na esteroidogênese se assemelha ao que ocorre em folículos atrésicos em comparação com folículos dominantes. Assumindo que o FGF18 pode estar envolvido no processo de esteroidogênese, afetando diretamente a expressão de efetores da via de sinalização Hippo em GCs e regulando a expressão de genes-chave que controlam esse evento, relacionamos a função da via de sinalização Hippo com o FGF18 e a regulação da foliculogênese em GCs bovinos e analisamos diferentes alvos de interação YAP1-TEAD para demonstrar, in vitro, a importância da via Hippo no processo de divergência folicular. Com o intuito de estabelecer essa relação, realizou-se experimentos com células da granulosa de folículos ovarianos de fêmeas boninas oriundas de abatedouros. Os experimentos foram realizados com diferentes concentrações de FGF18 (0, 1, 10 e 100 ng/mL) administradas no quinto dia de cultivo. As células da granulosa foram cultivadas durante seis dias em placas de 24 poços com densidade de 0,5x10-6 células por poço em meio DMEN modificado livre de soro fetal bovino. Primeiro dia do cultivo, caracterizado como dia zero, as células foram mantidas apenas com insulina (10 ng/mL), permanecendo até a primeira troca de meio. No dia dois e no dia quatro do cultivo, foi realizada a troca de 70% do meio de cultivo e acrescentou tratamento com FSH (1ng/mL), insulina (10ng/mL) e no quinto dia foi adicionado o tratamento com as diferentes concentrações de FGF18 (0, 1, 10 e 100 ng/mL). Observou-se uma diminuição nos níveis de mRNA de CTGF e CYR61, genes de proliferação expressos quando a proteína YAP encontra-se no núcleo celular e a via de sinalização Hippo está inativa, e uma diminuição da expressão dos genes BAX e BCL2, indicando a ocorrência da apoptose das células. A expressão de mRNA de STAR e CYP19 não tiveram diferença significativa. Outro gene importante que foi possível observar a redução da expressão RNAm é o GFPT2, que indica a redução do metabolismo hexosamina, uma amina importante para que as células consigam exercer suas funções fisiológicas e seus efeitos metabólicos. Como a translocação de YAP é muito dinâmica, acredita-se o tempo de tratamento das células com FGF18 pode ter influenciado nos resultados obtidos, pois há estudos que indicam que com 12 horas de tratamento há um aumento de CTGF, ou seja, as CGs estavam sendo tratadas por 24 horas já estavam entrando em apoptose e houve uma diminuição na expressão de CTGF, um gene de proliferação celular.
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