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dc.creatorSouza, Julia Brandt de
dc.date.accessioned2023-05-30T19:02:09Z
dc.date.available2023-05-30T19:02:09Z
dc.date.issued2023-03-31
dc.identifier.urihttp://repositorio.ufsm.br/handle/1/29252
dc.description.abstractIndomethacin (INDO) reduces SARS-CoV replication in vitro and in vivo, but its effects against SARS-CoV-2 are poorly known. In addition to possible direct antiviral effects, we hypothesized that INDO could also modulate SARS-CoV-2-induced inflammatory response. The purinergic system controls extracellular metabolism and signaling activated by ATP which, in a viral infection process, is released by infected cells and can activate, via the P2X7 receptor, the release of pro-inflammatory cytokines. Furthermore, ATP, by itself, can act as a chemoattractant and recruit immune cells to the site of injury. In this study we evaluated whether INDO alters the cytopathic effect of SARS-CoV-2 in Vero E6 and Calu-3 cells and whether INDO alters the inflammatory response induced by the serum from patients with severe COVID-19 (intensive care unit) in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), by measuring selected targets involved in purinergic signalling. INDO protected cells against SARS-CoV-2 infection [multiplicity of infection (MOI) 0.1 and 0.01]- and COVID-19 serum stimulusinduced cytopathic effect. Experimental data revealed an IC50 of 50 µM for INDO in Vero E6 cells upon MOI 0.01. INDO (10 µM) completely abolished the cytopathic effect in Calu-3 and PBMCs. In addition, PBMCs exposed to serum from COVID-19 patients presented higher extracellular ATP hydrolytic activity than cells exposed to control serum. The addition of 10 μM and 100 μM INDO drastically reduced COVID-19 serum-induced increase of extracellular ATP hydrolysis. SARS-CoV-2 exposure increased the expression of P2X7 receptor, CD39 and CD73 in Vero E6 cells. Interestingly, 10 μM INDO also suppressed SARS-CoV-2 infectioninduced increase of TNF-α in the supernatant of PBMCs and Vero E6 cultures. Reactive oxygen species were also reduced in the Vero E6 cell line supernatant after treatment of 10 μM INDO. Taken together, our results suggest that INDO protects against SARS-CoV-2-induced cytopathic effects and suppresses ATP-associated inflammatory responses. Thus, this drug may be an excellent candidate for the treatment of COVID-19.eng
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESpor
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de Santa Mariapor
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/*
dc.subjectSistema purinérgicopor
dc.subjectCovid-19por
dc.subjectCitocinaspor
dc.subjectEspécies reativas de oxigêniopor
dc.subjectPurinergic systemeng
dc.subjectCytokineseng
dc.subjectReactive oxygen specieseng
dc.titleAnálise dos efeitos da indometacina na infecção por SARS-CoV-2 e na resposta inflamatória associada ao sistema purinérgicopor
dc.title.alternativeAnalysis of the effects of indometacin on SARS-CoV-2 infection and the associated immune response, mediated by the purinergic systemeng
dc.typeDissertaçãopor
dc.description.resumoA indometacina (INDO) reduz a replicação do SARS-CoV in vitro e in vivo, mas seus efeitos contra o SARS-CoV-2 são pouco conhecidos. Além dos possíveis efeitos antivirais diretos, levantamos a hipótese de que a INDO também pode modular a resposta inflamatória induzida por SARS-CoV-2. Entre os sistemas que podem estar envolvidos com a patogênese da COVID-19, destacamos o sistema purinérgico. O qual, controla o metabolismo extracelular e a sinalização ativada pelo ATP que, em um processo de infecção viral, é liberado pelas células infectadas e pode ativar, via receptor P2X7, a liberação de citocinas pró-inflamatórias. Além disso, o ATP, por si só, pode atuar como um quimioatraente e recrutar células imunes para o local da lesão. Diante deste contexto, avaliamos se a INDO altera o efeito citopático do SARSCoV-2 em células Vero E6 (células epiteliais de rim de macaco verde africano) e Calu-3 (células epiteliais pulmonares) e se altera a resposta inflamatória induzida pelo soro de pacientes com COVID-19 grave (aqueles internados em unidade de terapia intensiva) em células mononucleares do sangue (CMSPs), medindo alvos selecionados envolvidos na sinalização purinérgica. Os resultados demonstram que a INDO protegeu as células contra os efeitos citopáticos induzidos pela infecção por SARS-CoV-2 [multiplicidade de infecção (MOI) 0,1 e 0,01] - e pelo soro de pacientes com COVID-19. Dados experimentais revelaram um IC50 de 50 µM para INDO em células Vero E6 em MOI 0,01. INDO (10 µM) aboliu completamente o efeito citopático em Calu-3 e CMSPs. Além disso, as PBMCs expostas ao soro de pacientes com COVID-19 apresentaram maior atividade de hidrólise de ATP extracelular do que as células expostas ao soro controle. A adição de 10 μM e 100 μM de INDO reduziu drasticamente o aumento da hidrólise de ATP extracelular induzido pelo soro de COVID-19. A exposição ao SARS-CoV-2 aumentou a expressão de componentes chaves do sistema purinérgico, tais como receptor P2X7, CD39 e CD73 nas células Vero E6. Curiosamente, 10 μM de INDO também suprimiu o aumento de TNF-α induzido pelo SARS-CoV-2 no sobrenadante de CMSPs e Vero E6. Espécies reativas de oxigênio também foram reduzidas no sobrenadante da linhagem celular Vero E6 após o tratamento de 10 μM de INDO. Tomados em conjunto, nossos resultados sugerem que a INDO protege contra os efeitos citopáticos induzidos por SARS-CoV-2 e suprime as respostas inflamatórias associadas ao ATP. Assim, este medicamento pode ser um excelente candidato para o tratamento da COVID-19.por
dc.contributor.advisor1Pillat, Micheli Mainardi
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/5712882578120587por
dc.contributor.referee1Barbisan, Fernanda
dc.contributor.referee2Lenz, Luana Suéling
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/3082356109933547por
dc.publisher.countryBrasilpor
dc.publisher.departmentFarmacologiapor
dc.publisher.initialsUFSMpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-Graduação em Farmacologiapor
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::FARMACOLOGIApor
dc.publisher.unidadeCentro de Ciências da Saúdepor


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