Um multiplex PCR/RT-PCR para a detecção de vírus associados a doenças neurológicas em equinos
Fecha
2024-02-22Primeiro coorientador
Silva Júnior, José Valter Joaquim
Primeiro membro da banca
Brum, Mario Celso Sperotto
Segundo membro da banca
Maia, Rita de Cássia Carvalho
Metadatos
Mostrar el registro completo del ítemResumen
Infecções neurológicas virais se constituem em importantes causas de morbidade e
mortalidade em equinos, podendo acometer animais de todas as idades e raças. O vírus da
raiva (RABV), herpesvírus equino tipo 1 (EHV-1), alfavírus [vírus da encefalite equina do
Leste (EEEV), do Oeste (WEEV), encefalite equina venezuelana (VEEV) e Madariaga
(MADV)] e os flavivírus [vírus do Nilo Ocidental (WNV), da encefalite de São Luís
(SLEV), Rocio (ROCV) e encefalite japonesa (JEV)] são os principais agentes virais das
encefalites ou encefalomielites equinas. As infecções por esses vírus resultam em
manifestações clínicas semelhantes, o que reforça a necessidade do diagnóstico laboratorial
para a correta identificação do agente. Assim, para contribuir para o diagnóstico mais ágil e
rápido dessas infecções, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um ensaio PCR/RT-PCR
multiplex convencional (end-point) para a detecção diferencial e simultânea desses agentes.
Inicialmente, foram confeccionados primers específicos e de alta cobertura para detecção
de RABV, EHV-1 e flavivírus. Para detecção de alfavírus, foi confeccionado um par de
primers para EEEV, WEEV e MADV e outro para VEEV. Em seguida, otimizou-se a
concentração dos primers, enzimas e temperatura de anelamento/extensão do ensaio
multiplex, além da avaliação quanto à concentração do gel de agarose para a correta
diferenciação dos alvos. Após a otimização da reação, determinou-se a sensibilidade
analítica para RABV, EHV-1 e MADV. A especificidade analítica do multiplex foi avaliada
frente a outros potenciais agentes de doença neurológica em equinos: Streptococcus equi
subsp. equi, Trypanosoma evansi, Sarcocystis neurona, Neospora spp. e herpesvírus equino
tipo 4 (EHV-4). O multiplex PCR/RT-PCR amplificou individual e simultaneamente todos
os alvos: alfavírus (EEEV-WEEV-MADV, 381pb), EHV-1 (255pb), RABV (173pb),
VEEV (119pb) e flavivírus (WNV-SLEV-ROCV-JEV, 96-100pb). O limite de detecção do
PCR/RT-PCR multiplex foi de 1,07, 3,4 e 53,7 TCID50 para EHV-1, RABV e MADV,
respectivamente. A sensibilidade analítica para os flavivírus (WNV, SLEV, ROCV e JEV)
e outros alfavírus (EEEV, VEEV, WEEV e VEEV) não foi avaliada devido à falta de
acesso à contenção de biossegurança nível 3. Não foram observadas amplificações
inespecíficas de outros potenciais agentes de doenças neurológicas em equinos. Em
conclusão, a capacidade de detecção simultânea e diferencial dos principais agentes de
doença neurológica equina, aliada à alta especificidade analítica, tornam o ensaio multiplex
descrito uma ferramenta útil para o diagnóstico diferencial e vigilância dessas infecções
neurológicas de equinos.
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