Expressão de anexina II em oócitos e no desenvolvimento embrionário bovino
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Data
2004-08-31Autor
Costa, Luís Fabiano Santos da 
Primeiro orientador
Gonçalves, Paulo Bayard Dias
Primeiro membro da banca
Mello, Carlos Fernando de
Segundo membro da banca
Barreto, Katia Padilha
Metadata
Mostrar registro completoResumo
O objetivo do presente estudo foi determinar o perfil de expressão de anexina II (ANEII) em folículos pré-antrais, oócitos e desenvolvimento embrionário bovino, e sua regulação pelo retinol e fator de crescimento semelhante à insulina-I (IGF-I). Expressão de ANEII foi verificada em folículos primordial, primário e secundário, em oócitos de folículos antrais de diferentes tamanhos (<3mm, 5-8mm e >8mm de diâmetro), em embriões de 2, 4, 8, 16 e 32
células e em blastocisto e blastocisto expandido. Além disso, foi investigada a influência do retinol sobre a expressão de ANEII em oócitos e no desenvolvimento embrionário e, neste último, também foi estudada a participação do IGF-I na expressão dessa proteína. Ovários de fêmeas bovinas adultas e de fetos foram coletados em abatedouro e submetidos a punção folicular ou isolamento de folículos pré-antrais. Complexos cumulus-oócito e folículos préantrais foram processados para extração de RNAm, obtenção de cDNA e
realizado reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Foram utilizados embriões bovinos produzidos in vitro em diferentes estádios de desenvolvimento em meio SOF e também suplementados com retinol e IGF-I. Os embriões foram processados para extração
de RNAm, obtenção de cDNA e realizada a reação da polimerase em cadeia (PCR) com oligonucleotídeos específicos para ANEII. Apenas folículos préantrais secundários apresentaram expressão de ANEII. Em estádio de vesícula
germinativa (VG), os oócitos oriundos de diferentes tamanhos foliculares diferiram entre si (p<0,05) quanto à expressão de ANEII, onde oócitos de folículos <3mm e de 5-8mm foram significativamente inferiores aos oócitos de folículos >8mm. Em metáfase II (MII), oócitos de folículos <3mm apresentaram
menor expressão de ANEII em relação à oócitos de folículos >8mm (p<0,05) e não diferiram de oócitos de folículos de 5-8mm. No entanto, oócitos de folículos de 5-8mm foram similar na expressão de ANEII aos oócitos de folículos >8mm. O
retinol utilizado no período de maturação promoveu um incremento na expressão de ANEII quando comparado ao controle (p<0,05). A ANEII está presente em todos os estádios de desenvolvimento embrionário precoce, com exceção em embriões de 16 células. A utilização de retinol durante o desenvolvimento embrionário, promoveu um incremento significativo (p<0,05) na produção de
blastocisto, avaliados no dia 6 após a fecundação, em relação ao grupo controle e ao grupo IGF-I. No grupo controle foi obtido um percentual de 20,5% (24/117) de blastocistos sobre o número total de oócitos cultivados, não diferindo do grupo IGF-I, onde se obteve um índice de 25,8% (24/93) de blastocistos. No grupo retinol, o percentual de blastocisto foi significativamente superior com 37,8% (45/119). Na avaliação semiquantitativa da expressão de ANEII em embriões produzidos em meio suplementado com IGF-I (10ng/ml de meio) ou retinol (0,1ng/ml de meio), foi observado uma menor expressão de ANEII quando estas substâncias estavam presentes no meio em relação ao controle (p<0,05). A
expressão semiquantitativa de ANEII não diferiu entre os grupos retinol e IGF-I. A ANEII tem uma maior expressão em oócitos capacitados e o retinol aumenta a disponibilidade de RNAm para ANEII, podendo estar envolvido na regulação da
competência oocitária por diminuir a tradução ou evitar a degradação. A produção de embriões in vitro é incrementada na presença de retinol que atua modulando a expressão de ANEII durante o desenvolvimento embrionário. A diminuição na
expressão de ANEII na embriogênese de bovinos determina um aumento qualitativo e quantitativo na produção in vitro de embriões.