Estudos de métodos cromatográficos e biológico para análise do anticorpo monoclonal ramucirumabe
View/ Open
Date
2022-01-28Primeiro membro da banca
Macedo, Rui Oliveira
Segundo membro da banca
Soares, Carlos Roberto Jorge
Terceiro membro da banca
Souza, Fabio Santos de
Quarto membro da banca
Silva, José Edson Paz da
Metadata
Show full item recordAbstract
O Ramucirumabe (RAM) é um anticorpo monoclonal humano anti–VEGFR–2, que desenvolve sua função antiangiogênica ao diminuir a vascularização para consequente redução do crescimento tumoral. Na clínica, é utilizado para o tratamento de pacientes adultos com câncer gástrico ou da junção gastroesofágica avançado, câncer de pulmão, câncer colorretal e hepático. Estruturalmente é uma imunoglobulina da classe IgG, produzida pela tecnologia do DNA recombinante em células de mieloma murino (NS0). Neste trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por cromatografia líquida em fase reversa (CL–FR) e cromatografia líquida por exclusão molecular (CL–EM) para avaliação de RAM em produtos biofarmacêuticos. Além disso, foi desenvolvido bioensaio por cultura em células A549 in vitro para avaliação da potência do produto biotecnológico. No método por CL–FR utilizou–se a coluna ZORBAX 300SB–C18, mantida a 80ºC. A fase móvel foi constituída de ácido trifluoracético (TFA) 0,1% v / v em água e TFA 0,1% v / v em acetonitrila (ACN), com eluição por gradiente, fluxo de 1 mL / min e detecção por arranjo de diodos (DAD) em 214 nm. No método por CL–EM, foi utilizada coluna BioSepSECs2000, mantida a 35 °C, fase móvel composta por fosfato de potássio monobásico (140 mM), fosfato de potássio dibásico (60 mM) e cloreto de potássio (250 mM), pH 7,0, com eluição isocrática de 0,8 mL / min e detecção por DAD em 214 nm. O RAM foi eluído com tempos de retenção de 9,7 e 8,7 min, sendo linear na faixa de concentração de 0,125 – 10 mg / mL (r2 = 0,9998) e 0,250 – 10 mg / mL (r2 = 0,9994), respectivamente, para CL–FR e por CL–EM. A especificidade dos métodos foi verificada e confirmada por estudos de degradação forçada, interferência dos excipientes da formulação e pureza dos picos. Os limites de detecção e quantificação foram de 0,03 e 0,08 mg / mL para o método por CL–FR e 0,04 e 0,13 mg / mL, para CL–EM. As médias da exatidão foram de 99,72 e 100,08 com bias de 0,57 e 0,60%, respectivamente. O bioensaio in vitro da antiproliferação celular em células A549 foi desenvolvido e aplicado para avaliação da atividade biológica de RAM. A correlação entre os métodos analíticos por CL–FR e CL-EM com o bioensaio por cultura de células, foi calculada pelo coeficiente de correlação de Pearson (r), que forneceu os valores de r = 0,9053 e r = 0,9353, respectivamente, demonstrando a significância dos dados. Assim, sugere–se que os métodos desenvolvidos e validados por CL–FR e CL–EM em conjunto com o bioensaio, sejam aplicados para aprimorar o controle de qualidade, contribuindo para garantir a segurança e eficácia terapêutica do produto biotecnológico.
Collections
The following license files are associated with this item: