Pesquisa de métodos cromatográficos para quantificação e caracterização do certolizumabe pegol
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Data
2022-05-24Primeiro membro da banca
Silva, Carine Viana
Segundo membro da banca
Malesuik, Marcelo Donadel
Terceiro membro da banca
Sangoi, Maximiliano da Silva
Quarto membro da banca
Souza, Fábio Santos de
Metadata
Mostrar registro completoResumo
O certolizumabe pegol (CZP) é um fragmento de um anticorpo monoclonal (mAb)
humanizado recombinante produzido em E. coli, conjugado com polietilenoglicol
(PEG) que atua inibindo a atividade do Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-α). O
CZP apresenta indicação terapêutica no tratamento de enfermidades inflamatórias
crônicas como, a artrite reumatoide e a doença de Crohn. Métodos por
cromatografia líquida por exclusão molecular (CL-EM) e por fase reversa (CL-FR)
foram desenvolvidos e validados para quantificação de CZP em produtos
biotecnológicos. O método por CL-EM foi desenvolvido em coluna cromatográfica
BioSep-SEC-S3000 (300 x 4,6 mm, 5μm, 290 Å) mantida à 35°C. A fase móvel A
consistiu de 100mM de fosfato de sódio monobásico e 200mM de cloreto de sódio
pH 7,0 e a fase móvel B consistiu de Etanol (95:5, v/v), com fluxo de 0,5mL/min e
detecção por DAD a 214 nm. No método CL-FR determinou-se a condição analítica
com coluna Zorbax 300SB C18 (4.6 x 150 mm, 3,5 µm), mantida a 80°C, com fase
móvel A constituída de 0,1% (v/v) de ácido trifluoracético (TFA) em água e fase
móvel B elaborada por propanol:acetonitrila:água:TFA (70:20:9,9:0,1, v/v). A eluição
ocorreu em gradiente de concentração da fase móvel em fluxo de 1 ml/min e
detecção por detector de arranjo de diodos (DAD) em 214nm. O CZP foi eluído nos
tempos de retenção de 5,6 e 9,0 min, sendo linear na faixa de concentração de 1 –
40 mg / mL (r² = 0,9993) e 1 – 40 mg / mL (r² = 0,9997), respectivamente, para CLEM e CL–FR. A especificidade dos métodos foi investigada por estudos de
degradação forçada, interferência dos excipientes da formulação e análise da pureza
dos picos. Os limites de detecção e quantificação foram de 0,14 e 0,41 mg / mL para
o método por CL–EM e 0,06 e 0,17 mg / mL para CL–FR. As médias da exatidão
foram de 100,50 e 99,80 com bias de 0,85 e 0,82 %, respectivamente, para os
métodos por CL-EM e CL–FR. A validação dos métodos seguiu as diretrizes
estabelecidas nos guias oficiais da Agência Nacional de Vigilância Sanitária
(ANVISA) e da Conferência Internacional de Harmonização (ICH). Além disso,
estudou-se bioensaio por cultura celular utilizando a linhagem MONO-MAC-6
estimulada por lipopolissacarídeo (LPS), para avaliação da atividade biológica do
CZP e inibição da liberação de TNF-α, que se mostrou significativa. Realizaram-se
estudos de correlação entre os métodos validados, visando contribuir para aprimorar
o controle de qualidade do produto biotecnológico, no intuito de garantir a segurança
e eficácia terapêutica.
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