Purificação, caracterização e dosagem radioimunológica de glicopoteínas associadas à gestação em zebuínos
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Data
2002-03-26Autor
Sousa, Noelita Melo de 
Primeiro orientador
Figueiredo, José Ricardo de
Metadata
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As glicoproteínas associadas à gestação (PAGs) constituem uma extensa família de proteases
aspárticas expressas na camada celular externa da placenta de artiodáctilos. N a primeira parte do
presente trabalho, dois procedimentos bioquímicos foram usados para caracterizar as PAGs
isoladas a partir de cotilédones fetais zebuínos ( Bos indicus ). O primeiro protocolo, usado para
isolar as PAGs de placentas coletadas no último tr imestre de gestação, incluiu a extração de
proteínas em pH neutro, precipitação ácida, precipitações em sulfato de amônia, cromatografias
de troca de ânions e de cátions. O segundo protocolo, usado para isolar a PAG a partir de placentas
coletadas ao prime iro e segundo trimestres de gestação, incluiu a extração de proteínas em pH
ácido e alcalino, seguida por cromatografia de afinidade em gel de pepstatina A agarose. O
radioimunoensaio utilizado para a dosagem da PAG taurina foi empregado para monitorar a
i munoreatividade ao longo do procedimento de isolamento. As frações resultantes das
cromatografias de troca de cátions e de afinidade foram analisadas por eletroforese e Western Blot,
antes de serem transferidas à membranas de polivinilideno difluoridro par a a determinação da
seqüência de aminoácidos N terminal. Diferentes isoformas de PAG, com massas moleculares de
51 a 69 kDa e pIs de 3,1 a 6,7, foram identificadas em placentas de zebuínos. As proteínas
imunoreativas resultantes da cromatografia de troca d e cátions das frações DEAE 0 M a 0,16 M
NaCl revelaram a existência de uma única seqüência N terminal (entre 10 a 25 aminoácidos de
comprimento), a qual é idêntica à seqüência da boPAG 1. A mesma seqüência (14 aminoácidos)
foi encontrada após cromatografia de afinidade. Estes resultados indicaram a expressão de uma
única seqüência N terminal de PAG em placentas de zebuínos coletadas em diferentes estádios
gestacionais. Na segunda parte do presente trabalho, dois sistemas radioimunológicos foram
usados para determinar as concentrações plasmáticas de PAG durante a gestação e período pós
parto em vacas zebus da raça Azawak. Doze fêmeas diagnosticadas como gestantes por palpação
retal tiveram amostras de sangue coletadas a intervalos de 5 a 10 dias. As coletas f oram feitas
aproximadamente entre a 8 a semana de gestação e a 10 a semana pós parto. Uma vaca inicialmente
diagnosticada como gestante mostrou concentrações de PAG inferiores à sensibilidade do teste
(<0,20 ng/ml) e não pariu. Outra vaca mostrou concentraçõ es de PAG anormalmente elevadas
durante a gestação, sendo excluída do perfil normal de PAG. As outras 10 vacas diagnosticadas
como gestantes apresentaram perfis de PAG bastante homogêneos. Nestes animais, as
concentrações aumentaram progressivamente da 8 a à 35 a semanas de gestação (de 6,0 4,2 ng/ml
a 196,0 34,8 ng/ml), permanecendo relativamente constantes até a 39 a semana (210,8 74,8
ng/ml). Durante a última semana de gestação, as concentrações de PAG aumentaram
significativamente (P<0,0001), sendo alcança das os mais altos níveis (1.095,6 607,2 ng/ml).
Após o parto, as concentrações de PAG diminuíram significativamente (P<0,05) até a 2 a semana
pós parto (384,4 85,6 ng/ml) e após lentamente até a 10 a semana. Estes resultados demonstraram
que as concentrações plasmáticas de PAG em zebuínos foram inferiores às previamente
observadas em raças taurinas entre a 35 a e a 39 a semanas de gestação.
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