Impacto toxicogenômico do bisfenol A em diferentes modelos experimentais e potencial efeito reversor de um multisuplemento alimentar
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Date
2024-05-15Primeiro coorientador
Barbisan, Fernanda
Primeiro membro da banca
Martín, Manuel Grandal
Segundo membro da banca
Prigol, Marina
Terceiro membro da banca
Brucker, Natália
Quarto membro da banca
Santos, Roberto Christ Vianna
Metadata
Show full item recordAbstract
Introdução: O Bisfenol A (BPA) é um monômero sintético amplamente utilizado na indústria de plásticos. Considerado um poluente ambiental, atua como um disrruptor endócrino. Suas formas livres no organismo estão associadas ao desenvolvimento de doenças crônicas não transmissíveis (DCNTs). Entretanto, resultados relacionados aos mecanismos biológicos pelo qual o BPA age, ainda são conflitantes. É possível que, o BPA cause desbalanço oxidativo e/ou inflamatório independentemente do tipo de organismo ou célula. Assim, como tentativa de atenuar esses efeitos, muitos estudos se concentram nas propriedades de frutos e compostos naturais, associados ou isolados. Objetivo: avaliar o impacto toxicogenômico do BPA em marcadores oxidativos, genotóxicos e inflamatórios utilizando um modelo in vivo de minhocas californianas vermelhas (Eisenia fetida) e, um modelo in vitro de cultura de células do epitélio pigmentar da retina humana (ARPE-19) e caracterizar o potencial reversor de um multissuplemento a base de Guaraná (Gua), Selênio (Se) e L- Carnitina (LC) (GSC®). Metodologia: O trabalho está dividido em dois artigos. No artigo 1 foi avaliado in vivo o impacto do BPA sob os marcadores geno-oxi-inflamatórios: a) o efeito da exposição aguda (24 h e 72h) de minhocas adultas a diferentes concentrações de BPA (0,1, 0,3, 1, 10 e 30 μM); b) A citoxicidade do BPA e a modulação da proliferação de celomócitos foram determinadas por citometria de fluxo; c) Os seguintes marcadores oxidativos foram quantificados por espectrofotometria: ânion superóxido (O2-), óxido nítrico (ON), lipoperoxidação (TBARS) e carbonilação de proteínas (PCarb); d) O impacto do BPA no dano de DNA de celomócitos foi determinado via ensaio do micronúcleo (MN); e) Alterações do BPA na eficiência imune das minhocas foram testadas através do ensaio de exposição de celomócitos a leveduras mortas no qual foi avaliada a formação de redes extracelulares de DNA e de corpos marrons através de análises cito-histológicas; f) Efeito genômico do BPA na modulação da expressão dos genes receptor tool-like (eaTLR) e lumbricina 1, via quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (qRT-PCR). No artigo 2, células da linhagem ARPE-19 foram expostas ao BPA (0,001, 0,01, 0,1, 1, 3 e 10 μM) para determinar a concentração mínima a induzir citogenotoxicidade. b) As células ARPE-19 foram então expostas concomitantemente à concentração selecionada de BPA, GSC e seus componentes isolados (Gua, 1,07 mg/mL; Se, 0,178 μg/mL; e LC, 1,43 mg/mL); c) Citometria de fluxo, ensaios bioquímicos, qRT-PCR, genotoxicidade, apoptose e proliferação celular foram avaliados. Resultados: A execução do protocolo 1 mostrou que baixas concentrações de BPA induziram aumento na taxa de proliferação de celomócitos, desbalanço na razão entre O2-/ON, frequência elevada de MN e apoptose. O BPA também induziu aumento da expressão do gene AMP1, mas menor eficiência na captura de leveduras mortas. Já, o trabalho executado pelo protocolo 2 os resultados sugerem que 10 μM de BPA é suficiente para induzir alterações citogenotóxicas. O BPA não alterou a razão de expressão de Bcl-2/BAX, mas induziu a superexpressão de Casp3 e Casp8, sugerindo que a apoptose foi induzida principalmente pela via extrínseca. O GSC reverteu parcialmente as alterações desencadeadas pelo BPA nas células ARPE-19. No entanto, o Se teve efeitos negativos inesperados nas células ARPE-19. Conclusão: Estes resultados sugeriram que o BPA induz alterações relevantes, independentemente do modelo estudado podendo estar associadas ao risco aumentado de DCNTs. Já o GSC® pode atenuar alterações nos marcadores oxidativos e genotóxicos relacionados à exposição das células ARPE-19, no entanto, suas propriedades antioxidantes, antiapoptóticas e genoprotetoras não foram universalmente compartilhadas, uma vez que o Se não apresentou impacto positivo.
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