Streptococcus equi subespécie equi: desenvolvimento de um ELISA indireto e avaliação da influência do processamento do antígeno na capacidade protetora de bacterinas
Fecha
2022-03-10Autor
Guizzo, João Antônio 
Primeiro orientador
Vargas, Agueda Palmira Castagna de
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Mostrar el registro completo del ítemResumen
A adenite equina é uma doença altamente contagiosa, de caráter inflamatório e desenvolvimento agudo, que acomete o trato respiratório superior dos equídeos ocasionando grandes perdas econômicas e déficit no desempenho dos animais acometidos. O agente etiológico é o Streptococcus equi subesp. equi (SEE), o qual possui um variado repertório de fatores de virulência que, em conjunto, propiciam ao microrganismo a capacidade de infectar e causar doença nos equinos. Globalmente, a adenite equina é considerada a doença com maior número de notificações na espécie equina. Portanto, ferramentas que venham somar na prevenção de surtos de adenite equina são extremamente necessárias e alvo de pesquisas em diversos laboratórios. Neste estudo, um dos objetivos foi a padronização de um ELISA para detecção de anticorpos contra SEE. O antígeno utilizado foi extraído da superfície de SEE cultivado em meio líquido. Após o cultivo o meio foi centrifugado e o pellet bacteriano obtido foi solubilizado em uma solução aquosa com 0,025% de desoxicolato de sódio. Após um processo de centrifugação e diálise o antígeno foi utilizado para sensibilização de três distintas placas comerciais próprias para ensaios desta natureza. Foram avaliadas, além da melhor placa, as melhores concentrações de antígeno e diluição dos soros equinos. Após otimização, o ensaio apresentou a seguinte configuração: placas MaxiSorp®, sensibilizadas com 1,2 μg do antígeno extraído, e soros equinos testados na diluição de 1:100. Com estas configurações e um cutoff de DO450nm 0.250, o ensaio apresentou 100% de especificidade e 95,9% de sensibilidade. Um segundo objetivo do estudo foi avaliar, em camundongos Swiss, a capacidade de 4 bacterinas distintas em induzir imunidade e proteção contra o desafio pelo SEE. Para esse estudo, duas cepas distintas de SEE (ATCC e VE) foram cultivadas e o antígeno bruto (AB) ou processado (AP) produzido com cada cepa, foi utilizado como vacina, resultando em 4 formulações distintas: ATCC AB; ATCC AP; VE AB e VE AP. Quatro grupos de camundongos foram imunizados duas vezes com intervalo de 14 dias com cada uma das formulações e duas semanas após a segunda imunização, os camundongos foram desafiados com o SEE pela via intranasal. Após o desafio experimental, os camundongos foram monitorados observando-se a perda de peso, sobrevivência e colonização da cavidade nasal. Ao final do experimento, 83,3% dos camundongos vacinados com as formulações baseadas no antígeno SEE VE (AB e AP) sobreviveram ao desafio. A proteção nos grupos imunizados com vacinas à base de SEE ATCC variou de acordo com a preparação do antígeno. Com exceção da SEE ATCC AP, as demais formulações resultaram em proteção significativamente (p<0,05) superior em relação ao grupo não vacinado. Independentemente da cepa, as vacinas formuladas com AB induziram títulos de IgG elevados em comparação com as vacinas contendo AP. A formulação baseada na cepa SEE VE AB foi significativamente mais imunogênica.
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